| 犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备 |
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| 引用本文： | 喻娇,曹馨,唐青海,侯鑫军,高翠翠,韩涛涛,黎露,刘会敬,唐斯萍.犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备[J].南方农业学报,2022,53(8):2359-2372. |
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| 作者姓名： | 喻娇 曹馨 唐青海 侯鑫军 高翠翠 韩涛涛 黎露 刘会敬 唐斯萍 |
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| 作者单位： | 衡阳师范学院生命科学与环境学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室/动物微生物新型检测技术及生物制剂衡阳市重点实验室, 湖南衡阳 421008 |
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| 基金项目： | 国家级大学生创新创业训练计划项目（202110546001）；湖南省自然科学基金面上项目（2021JJ30060）；湖南省教育厅科学研究项目重点项目（21A0442）；湖南省重点研发计划项目（2021NK2026） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆犬转录因子ELF4基因（cELF4），体外表达重组cELF4蛋白（rcELF4）并制备抗该蛋白的卵黄抗体（IgY），为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因，将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序，运用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码的氨基酸序列特征。将cELF4基因克隆至原核表达载体pET-28a，构建重组表达质粒pET28a-cELF4，分别转化大肠杆菌BL21（DE3）和Rosetta（DE3）感受态细胞，诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。将rcELF4蛋白分别与3种免疫佐剂（ISA 15AVG、 ISA 71VG、 ISA 201VG）乳化制备免疫原，通过免疫蛋鸡检测抗体滴度和IgY含量。构建真核重组表达载体pEGFP-cELF4，转染细胞后，利用免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）分析cELF4特异性IgY的免疫活性。【结果】cELF4基因（GenBank登录号MZ198105）的开放阅读框（ORF）为1992 bp，编码663个氨基酸残基。cELF4基因与狐ELF4基因的核苷酸相似性最高 （99.3%），而与小鼠的相似性最低 （81.5%）。结合系统进化结果发现， cELF4基因与狐、大熊猫、欧洲雪貂、北美水獭等动物ELF4基因的亲缘关系较近，而与人和猴等灵长类动物及啮齿类鼠ELF4基因的亲缘关系相对较远。rcELF4蛋白分子量大小约100 kD，可刺激鸡产生相应抗体， ISA 15AVG、 ISA 71VG和ISA201VG组血清抗体滴度均在首免后38 d达峰值，其中ISA 201VG组效价最高 （>128000倍），且3组rcELF4特异性IgY抗体均在首免后14 d转阳，首免后35 d达峰值，其中ISA 201VG组血清抗体滴度最高，为256000倍。3组鸡蛋卵黄中所提取的IgY含量最高值为4.09 mg/10 mL卵黄液，与rcELF4蛋白呈特异性反应、且与人ELF4蛋白存在交叉反应。rcELF4蛋白定位在细胞核。【结论】 rcELF4蛋白在大肠杆菌中成功表达，且存在翻译后修饰现象，不同类型的免疫佐剂对rcELF4蛋白的免疫原性产生不同的影响，所制备rcELF4抗体免疫活性良好，且与人ELF4蛋白存在交叉反应。
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| 关 键 词： | 犬ELF4蛋白 原核表达 真核表达 佐剂 卵黄抗体 |
| 收稿时间： | 2022-01-15 |
Prokaryotic expression and egg yolk antibody of canine ELF4 gene |
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| YU Jiao,CAO Xin,TANG Qing-hai,HOU Xin-jun,GAO Cui-cui,HAN Tao-tao,LI Lu,LIU Hui-jing,TANG Si-ping.Prokaryotic expression and egg yolk antibody of canine ELF4 gene[J].Journal of Southern Agriculture,2022,53(8):2359-2372. |
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| Authors: | YU Jiao CAO Xin TANG Qing-hai HOU Xin-jun GAO Cui-cui HAN Tao-tao LI Lu LIU Hui-jing TANG Si-ping |
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| Affiliation: | College of Life Sciences and Environment/Hunan Key Laboratory for Conservation and Utilization of Biological Resources in the Nanyue Mountainous Region/Hengyang Key Laboratory of New Detection Technology and Biological Agents of Animal Microorganism, Hengyang Normal University, Hengyang, Hunan 421008, China |
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