鸡传染性支气管炎病毒国内分离株D971 mRNA3和mRNA4cDNA的分子特征

参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)基因序列，设计合成了1对引物，经RT—PCR扩增得到了IBV国内分离株D971约1．3kb的片段，其中包含3a、3b、E及M蛋白基因的完整0RF，并将该片段进行了克隆和序列测定。与国内外部分IBV毒株序列比较表明：D9713a基因与CU—T2、D1466、DE072、M41、GA／99和UK／66的3a基因核苷酸序列同源性在83％～89％之间，氨基酸序列同源性为77％～91％，其中与CU—T2毒株的同源性最低(分别为83％和77％)；3b基因与上述毒株的对应核苷酸序列同源性在85％～95％之间，氨基酸序列同源性为72％～96％，与CU—T2的同源性最高(分别为95％和96％)；E蛋白基因与CU—T2、D1466、DE072、M41、Ark99、H52、Gray、GA／99和UK／66的核苷酸序列同源性在81％～86％之间，氨基酸序列同源性为74％～80％。不同毒株推导的E蛋白C末端表现不同特征，其中D971E蛋白C末端比CU—T2的时应区多9个氨基酸残基，而比本试验选用的其他参考毒株的相应区域短5～7个氨基酸残基。M基因与Cu—T2、DE072、Gray、M41、H120、H52、SD／97／02、LX4及D41的M基因核苷酸序列同源性在86％～91％之间，氨基酸序列同源性为85％～95％，其中与SD／97／02的同源性最高(分别为91％和95％)。对M蛋白的3个功能区进行序列比较发现，其N端第1～19位与SD／97／02的同源性最高，达90％，与CU—T2的同源性为80％，而与其他毒株同源性均低于61％；N端第20～100位含有3个跨膜蔬水区，D971与其他参考毒株比较，该部位第20～67位相对保守，其中与SD／97／02的同源性为100％，与其他毒株的同源性在97％以下；在推测的与核衣壳连接的C端，D971与SD／97／02在第101～182位同源性为100％，与疫苗株H52和H120及国内分离株LX4和D41的同源性为97％，而与本试验所选的国外参考毒株同源性在96％以下；在C端第184～219位D971与H52的同源性为100％，与H120和SD／97／02的同源性为97％，与其他毒株的同源性也在96％以下，而且在C末端第220～222及224位与上述国内外参考毒株均不同，国内外各毒株在该4个位点氨基酸为丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸和丝氨酸，而D971M蛋白的该区域氨基酸突变为丝氨酸、丙氨酸、缬氨酸和甘氨酸，该突变是否与D971的生物学特性尤其是组织嗜性的变化相关还有待于进一步研究。以上结果表明，D971与SD／97／02亲缘关系较其他毒株为近，但其遗传衍化又与国内使用的疫苗株H52和H120具有一定的联系。从其mRNA3和mRNA4cDNA的序列分析来看，D971又具有独特的分子特征。     

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

鸡大肠杆菌iss基因的克隆测序及原核表达

本实验对鸡大肠杆菌O2血清型菌株进行iss基因克隆测序，并在此基础上设计出两对套式引物，分别对含信号肽Miss基因序列和不含信号肽Miss基因序列进行扩增，并与原核表达载体pGEX-6p-1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表Miss基因序列进行比对，其同源性达100％。SDS—PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达，融合蛋白分子量分别约为36kD和33kD。     

放养与笼养对文昌鸡屠宰性能及肉品质的影响

对60只120日龄放养和笼养的文昌母鸡进行了屠宰性能和肉质测定.试验结果表明:笼养鸡活重、屠体重、半净膛率、全净膛率极显著高于放养鸡(P＜0.01),腹脂率显著高于放养鸡(P＜0.05);笼养鸡的腿肌率和胸肌率极显著低于放养鸡(P＜0.01);2种饲养方式下文昌鸡屠宰率差异不显著(P＞0.05);肌间脂肪和肌肉蛋白质含量笼养鸡略高于放养鸡(P＞0.05);肌肉水分含量笼养鸡显著低于放养鸡(P＜0.05).     

抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

养鸡、种稻轮作提高农田效益的尝试

<正> 养鸡、种稻轮作是指在农田放养优质三黄鸡与种植单季晚稻结合,在一块农田,一年内进行种养轮换。这种种养轮换方式既改善了农田土壤,降低了种粮生产成本,又有利于降低养鸡防病用药成本,提高单位农田面积的经济效益,是实现农业生产良性循环的较好模式,也是实现农业增效,农民增收的有     

如何提高育成期鸡的整齐度

雏鸡从7周龄到18或20周龄这一阶段称为育成期。整齐度是育成期的关键指标，它包括体重、胫长、性成熟整齐度。一般所说的整齐度是指体重整齐度，它是指群体中体重超过或低于标准平均体重10％范围内的鸡所占的百分比。整齐度反映出整个鸡群的生长发育情况，整齐度高说明鸡群生长发育一致，则鸡开产整齐，产蛋高峰高且维持时间长，所以，提高育成鸡的整齐度很重要。要提高育成鸡的整齐度，须按以下几个方面进行。     

从卵黄中检测鸡新城疫抗体

我国的养鸡业已由家庭式个体养鸡逐渐走向集体化养鸡，使疫病的预防和控制更加重要和困难，新城疫是鸡的常见烈性传染病之一，要做好对此病的预防和控制，应对鸡群进行抗体监测，只有了解鸡群的抗体水平，才能决定鸡群是否需要再做疫苗接种。当鸡群抗体水平高时，鸡群对新城疫有抗病力，不需     

鸡球虫病的综合防治

鸡球虫病是常见的一种肠道寄生虫病 ,是雏鸡的严重疾病之一 ,主要发生于 3月龄以内的小鸡 ,以 15～ 4 5日龄的雏鸡发病最多。成年鸡也会感染 ,但通常表现为慢性。本病的病原是艾美耳属的 9种球虫。常呈地方性流行 ,春、夏季多发 ,急性球虫病常造成大批死亡 ,中度感染主要影响生     

鸡传染性鼻炎的防治

鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起鸡的一种急性或亚急性的上呼吸道传染病。该病在生长发育鸡群和产蛋鸡群中广泛发生，使淘汰的鸡数增加，蛋鸡的产蛋量减少10％～40％，从而给养鸡业造成较为严重的经济损失，所以做好疾病的防治工作十分重要。本病以水平传播为主，慢性病鸡或健康的带菌鸡是主要传染源。秋季和冬季多发。当鸡舍内有害气体浓度过高等不良因素时，常导致本病大批发生。另外，常继发于鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎，并且与鸡毒支原体混合感染。