高效降解棉酚菌株的筛选鉴定及毒性试验

为了筛选一株能高效降解棉籽饼中棉酚毒素的菌株,以棉酚为唯一碳源,从棉田土壤中分离筛选对棉酚具有降解作用的菌株,得到具有较高降解活性的菌株M-9,其降解率达到94.74%,对其进行了菌株形态观察和生理生化鉴定并结合其16S rDNA序列,初步确定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。通过对M-9菌株的脱毒效果研究表明,其具有降解棉籽饼中游离棉酚的能力,脱毒后棉籽饼中游离棉酚的含量降至33.18 mg/kg,符合中国国家标准饲料卫生标准规定(GB13078-2001)：饲料原料棉籽饼中游离棉酚含量≤1200 mg/kg。并进行毒性饲喂试验,从而确定菌株M-9处理后的棉籽饼粉对小白鼠无毒性。     

固态发酵对棉籽粕棉酚脱毒及蛋白降解的影响

【目的】研究采用假丝酵母(Candida spp.)和黑曲霉(Aspergillus niger)对棉籽粕进行固态发酵后,棉籽粕中棉酚含量的变化及其中蛋白的降解规律。【方法】利用5株假丝酵母和2株黑曲霉,分别对棉籽粕进行单菌种及复合菌种固态发酵,试验设灭菌不接种组(灭菌组),灭菌分别接假丝酵母C1、C2、C3、C4、C5和黑曲霉A6、A7菌组,及灭菌接C1和A6复合菌组,共9个处理组和1个对照组,比较固态发酵前后棉籽粕底物中游离棉酚(FG)和结合棉酚(BG)的含量,采用SDS-PAGE凝胶电泳分析发酵前后棉籽粕底物中蛋白质和小分子肽分子质量的分布范围。【结果】(1)在高温高压灭菌处理对棉籽粕底物中大部分FG已脱毒的情况下,5株假丝酵母发酵组与灭菌处理组FG含量差异不显著,2株黑曲霉发酵组不但没有脱毒作用,反而使FG含量从灭菌处理组的24.739 mg/kg分别增加到211.451和176.135 mg/kg,假丝酵母和黑曲霉复合发酵组FG含量介于二者之间;(2)在灭菌处理已极显著降低(P<0.01)棉籽粕底物BG和总棉酚(TG)含量的情况下,各菌株发酵对BG和TG的含量影响差异不显著(P>0.05);(3)假丝酵母及黑曲霉固态发酵均能将棉籽粕底物中分子质量在20~100 ku的大分子蛋白降解为小分子蛋白和小分子肽,其中黑曲霉可将蛋白质降解为14 ku以下的小分子蛋白和小分子肽。【结论】(1)微生物固态发酵能使棉籽粕棉酚脱毒主要是高温高压灭菌的作用;(2)假丝酵母对棉籽粕中游离棉酚有一定的脱毒作用,而黑曲霉增加了游离棉酚含量,二者对棉酚均无明显降解作用;(3)黑曲霉固态发酵棉籽粕具有较强的蛋白降解能力,可将高分子质量的棉籽蛋白降解为14 ku以下的小分子蛋白和小分子肽。     

转基因棉子中棉酚的提取条件及含量测定

采用乙醇为提取液,对影响棉酚提取率的5种因素进行了考察.结果表明,提取液体所占的体积分数、提取温度和提取时间3种因素对提取率的影响较为显著.进一步进行3因素3水平中心组合试验,运用SAS软件建立了棉酚提取的二元回归方程,并通过岭脊分析得到棉酚最优提取条件为提取温度26.7℃,乙醇体积分数76.3%,提取时间4.5 h,棉酚得率预测值为0.109%.在优化条件下,对转基因与非转基因棉子中的棉酚进行提取,苯胺法测得转基因棉子中棉酚的提取率为0.103%,非转基因棉子中棉酚的提取率为0.104%.     

响应面优化棉子饼粕中棉酚的提取条件

 采用响应曲面法的Box-Behnken模式,以盐酸和80%乙醇混合溶液作为提取液浸提棉子饼粕中棉酚工艺条件进行了研究,并建立提取棉酚的二次多项数学模型,探讨了主要因素的影响效应及其交互作用。采用响应曲面法优化得出的最佳工艺条件为：浸提温度60℃,提取液用量为26 mL·g^-1,盐酸浓度为1 mol·L^-1,浸提时间为3.6 h,提取次数1次时,提取量为8.80 mg·g^-1。     

棉属植物种子中棉酚及其旋光体的研究

以高效液相色谱法（HPLC）分析了21个野生棉种和4个栽培棉种有代表性的品种种仁中的棉酚及其光学异构体的含量。各个棉种的棉酚含量从0到4.06%,差异很大;各个棉种种仁中的左旋（－）和右旋（＋）两种棉酚旋光体的含量均不相等,只有海岛棉以（－）棉酚居多;4个栽培棉种内各品种间（－）棉酚的量与两种旋光体之和的比值高度一致。除比克氏棉（G. bickii）外,澳洲棉（G.anstrale）、南岱华棉（G.nandewarense）和斯特提棉（G.sturtianum）均是种子无腺体且无棉酚的种质。阿拉伯棉（G.stocksii）和索马里棉（G.sonalense）种仁内虽有腺体,却难以测到棉酚。与经典法相比,HPLC法所测棉酚的量较低,原因在于前者所测常包括棉酚衍生物,而后者只测棉酚本身。     

S9606菌发酵脱毒棉籽粕饲喂蛋鸡

饲料中添加６．５％～１０％的含游离棉酚为０．０１０１％～０．０１６４％的发酵脱毒棉粕,鸡的产蛋率提高０．０３％～４．０３％。其中添加７．６６％的发酵脱毒棉粕的饲料,其经济效益最好,１０００ｇ蛋成本降低０．１７３２元、料蛋比由２．６２８７降到２．５２５０。试验组和对照组的鸡血清谷雨转氨酶活性、总蛋白含量、清蛋白和球蛋白的相对含量、清蛋白和球蛋白之比均差异不显著。说明饲喂脱毒棉粕的鸡,其肝脏和其他组织的功能正常、健康。     

绵羊棉酚中毒的病理生态学观察与分析

为研究饲喂棉酚对绵羊的影响,以乌鲁木齐华菱屠宰场周围长期饲喂棉籽饼的绵羊为研究对象,观察内脏的病变及华菱屠宰场采集的肝脏、肺脏等组织,进行石蜡切片、HE染色,组织病变观察。结果表明:绵羊颈部和胸腹部皮下组织有明显的浆液侵润,皮下脂肪轻度黄染,肝脏暗红色体积增大,质地变硬,屠宰流水线取出肝脏中静脉周围肝细胞坏死,肝组织中有许多空泡和泡沫状间隙,肾脏肾小管上皮细胞脂肪变性,心肌纤维发生脂肪变性等检测不同程度的病理组织学变化。     

实用饲料中棉籽浓缩蛋白替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能和肌肉品质的影响

本研究旨在探究实用饲料中棉籽浓缩蛋白替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能和肌肉品质的影响。在鱼粉含量为200 g/kg的基础饲料中，分别以0、52、104、156、208 g/kg棉籽浓缩蛋白等蛋白质替代基础饲料中0、25%、50%、75%、100%的鱼粉，制成5种等氮等脂试验饲料（FM20、FM15、FM10、FM5和FM0），并补充主要限制性氨基酸和胆固醇，饲喂初始体重为（1.20±0.05） g的凡纳滨对虾56 d。结果显示：与对照组（FM20组）相比，FM15、FM10组的生长性能无显著差异（P>0.05）,FM5、FM0组的增重率分别下降13.3%、16.2%(P<0.05)，饲料系数分别升高0.11、0.13(P<0.05);FM10、FM5、FM0组的出肉率显著降低（P<0.05）。在肌肉品质方面，各鱼粉替代组的体色以及肌肉质构特性（硬度、弹性、黏聚性、咀嚼性、剪切力）、常规成分与氨基酸（异亮氨酸和酪氨酸除外）含量和游离氨基酸、游离鲜味氨基酸总量与对照组相比均无显著差异（P>0.05）；各组在肌肉超氧化物歧化酶（SOD）活性和胶原蛋白、丙二醛（MDA...