牛冠状病毒N蛋白的原核表达及核酸适配体筛选

[目的]对牛冠状病毒N蛋白进行原核表达,利用指数富集的配基系统进化技术筛选N蛋白的核酸适配体,为该病诊断方法的建立奠定基础.[方法]根据牛冠状病毒基因序列,设计N蛋白编码基因特异性引物,扩增目的基因并通过酶切、连接、转化构建原核表达载体pET-28a-N,优化N蛋白表达条件,镍柱纯化获得高纯度高浓度的N蛋白.利用微孔板法,经过包被、封闭、加文库、洗脱、提取、PCR、胶回收和反筛等步骤从原始核酸适配体文库中筛选出N蛋白特异性适配体,连接T载体转入DH5a感受态细胞后,经菌落PCR鉴定和测序获得与N蛋白特异性结合的适配体序列,测定其结合常数,并利用在线软件预测其二级结构.[结果]成功表达出约55 kD的重组蛋白;经微孔板法筛选出67条适配体序列,其中N-12、N-33和N-45出现多次重复,经测定3条核酸适配体均具有环状、发卡结构,利于与目标蛋白稳定结合.[结论]筛选的3条核酸适配体有望用于牛冠状病毒病早期诊断用酶联适配体方法的建立.     

猪瘟病毒及其分子流行病学研究进展

猪瘟(Swine.Fever,SF)是猪的一种高度接触性传染病,在分子生物学兴起之前,猪瘟病毒(HCV或CSFV)按传统分类方法归属于披膜病毒科(Togaviridae)瘟病毒属(Pestivirus).随着分子生物学的发展,人们注意到在基因组结构与基因表达特征方面,瘟病毒更接近于黄病毒科(Flavividae),因此Wenger等将瘟病毒属归入黄病毒科,然而随着HCV分子生物学研究的不断深入,发现瘟病毒和黄病毒间存在一些差异,如病毒粒子成分、结构核苷酸与氨基酸序列的同源性、开放阅读框(ORF)所表达的第一个蛋白的酶活性以及病毒编码RNA依赖的RNA聚合酶活性.因此Hust等和Runenapf等建议将其单独列为一个新科——瘟病毒科(Pestiviridae).     

两种颜色栉孔扇贝卵及其早期胚胎磷脂和核酸含量的比较

用钼蓝比色法和紫外分光光度法分别测定栉孔扇贝（Chlamys farrPri）两种颜色的卵子及其早期胚胎中磷脂含量和核酸含量，并进行比较。结果表明，橘红色卵子的RNA含量较浅黄色的略高，而两种颜色卵子的DNA含量却非常相似；在2细胞期，高受精率的受精卵其RNA量迅速增加，DNA和磷脂含量变化不大，但低受精率的受精卵相对未受精卵而言，其DNA、RNA和磷脂含量略有降低；在32～64细胞期，受精率高的胚胎中DNA和磷脂含量增加幅度大，RNA基本保持恒定。磷脂含量与卵子或胚胎的颜色可能有关，核酸、磷脂含量的变化与受精率高低有关。本实验旨为鉴定扇贝卵子的质量提供了科学依据。     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的精细结构、核酸、多肽及血清学研究

对纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）进行了超微结构、紫外吸收、核酸类型及多肽ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的研究。同时用单克隆抗体对ＨＨＮＢＶ的两分离株和ＭＢＶ进行了血清学比较研究。用ＴＭＶ作为内标定物测得病毒粒子大小为１５０ｎｍ×４５０ｎｍ，其衣壳为两个帽状物端夹１３圈螺旋对称的园柱体结构。病毒在２６０ｎｍ处吸光系数为０．１１７ｍｇ／ｍＬ／ＯＤ２６０。病毒核酸为双链ＤＮＡ，分子量大于３５×１０６ｄ。病毒囊膜有１２种主要多肽。病毒衣壳有两种主要多肽。从寿光（ＨＨＮＢＶ—９３７）和青岛（ＨＨＮＢＶ—９３８）分离到的病毒种在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和抗ＨＨＮＢＶ—９３７单抗ＥＬＩＳＡ反应上没有显著差异。ＨＨＮＢＶ与斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）在抗原决定簇上存在差别。     

禽源致病性沙门氏菌四环素耐药性基因tetC的PCR扩增及序列分析

通过对临床分离并经生化试验和血清学试验鉴定的20株禽源沙门氏菌和1株标准株C79—13进行药敏试验．结果证明：有19株有高耐药性．另外2株有低耐药性，耐药率达100％；对其四环素耐药基因tetC进行了PCR扩增，结果获得以质粒为模板的特异性产物，与药敏试验符合率为100％；利用PCR检测四环素，耐药基因tetC具有很高的敏感性和特异性．从而为禽类致病性沙门氏菌的耐药性检测提供了高效敏感的手段。     

浅析病毒、弧菌共同作用引发的虾病

1 发病情况 6月21日在营口市红旗村养虾比较集中的区域,发现7个池塘对虾沿池边游荡,对外界反应迟钝,摄食率下降,肉眼观察虾体有红尾烂鳃、空胃,剥开甲壳有的有白斑点、溃疡症状.取病虾样本,采用核酸探针法检测,结果成阴性.     

海洋生物技术在水产养殖上的应用

本文综述了近十年来海洋生物技术在水产养殖上的应用,其中包括:基因转移技术、染色体操作、鱼类性别的控制、鱼病的早期诊断、预防和治疗、贝类的变态和附着、海洋自然产物和药物、经济海藻的原生质体分离和海带单倍体克隆的建立。作者认为,海洋生物技术在水产养殖上的应用,必须依赖于基础的研究。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3株GP5-M-N蛋白核酸疫苗的构建及免疫原性

为探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸疫苗用于免疫预防的可行性,试验用PCR方法扩增出PRRSV HB-3株GP5、M和N基因,通过Linker序列将GP5和M串联为GP5-M,双酶切后和N基因一起插入真核表达载体构建重组质粒pcDNA-GP5-M-N,经酶切鉴定表明GP5、M和N基因和载体连接正确。然后将重组质粒转染至Marc-145细胞,经间接免疫荧光及Western blot分析证实重组蛋白能在Marc-145细胞中表达。然后用重组质粒pcDNA-GP5-M-N免疫Balb/c小鼠,中和抗体检测结果表明,首免后2周即有小鼠产生可检测到的病毒中和抗体(1∶4),随后抗体水平快速升高,第8周抗体效价达到最高(1∶32)。说明本试验构建的重组质粒pcDNA-GP5-M-N能诱发免疫小鼠产生较高水平的中和抗体,为PRRSV核酸疫苗的研究奠定了基础。     

2004-2012年国内猪圆环病毒Ⅱ型流行状况报告简

本文对近十年来国内猪圆环病毒Ⅱ型的流行状况进行了综述,包括感染抗体的检测和病原学的检测,并对可利用数据进行了统计分析;总结出近十年来国内猪PCV2g染的流行特点。     

Removal of Dispersed Dyes from Aqueous Solution Using Activated Carbon Prepared from Olive Stones

In order to valorize olive stones and to show its potential use in the sorption of two dispersed dyes, it was transformed in activate carbon and characterized. The effects of different system variables： pH, agitation speed, temperature and initial dye concentration were studied in the batch tests. The adsorption capacity of activated carbon for the dyes removal was found to be affected by the solution＇s pH. Acidic pH was found the favour disperse dyes removal. Over 95% removal was achieved for both the dyes at pH 3. The equilibrium time for both dyes was 30 min. Both Langmuir and Freundlich isotherms could be used to describe the adsorption of the dyes. Freundlich adsorption model succeeded in fitting the adsorption isotherms of dyes on olive stones activated carbon in single-solute systems, and prediction of the competitive adsorption behavior of dyes with the Freundlich-based Sheindorf-Rebuhn-Sheintuch （SRS） model gave acceptable results.