感染玉米粗缩病毒后玉米植株的超微结构病变研究

 对接种后感染玉米粗缩病毒 (MRDV)的玉米植株的叶片及侧根超微结构进行了电镜观察。研究结果表明 ,受侵染的玉米叶肉细胞中叶绿体的数量有所减少 ,细胞质丰富 ,细胞器发生了不同程度的病变。液泡膜发生明显内陷 ,随着病情的严重液泡膜内陷加剧 ,呈极度松弛状态 ,局部破裂 ;叶绿体被膜破裂 ,轻者成为一松弛的单膜结构 ,严重者被膜完全消失 ,叶绿体中的片层膜系统消失 ,取而代之的是大量淀粉粒。线粒体及细胞核形态异常 ,随着病害的加重 ,线粒体逐渐肿大 ,基粒缩小 ,膜破裂 ,类囊物流入细胞中 ,细胞膜破裂。在玉米植株的根部细胞中观察到了大量的病毒粒体 ,这些粒体大多集中在细胞壁处形成病毒质体。感病细胞的叶绿体、线粒体、核、质膜及胞间联丝中均未见病毒状颗粒     

猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗安全性和免疫原性测定

选用猪繁殖与呼吸综合征病毒福建分离株(PRRSV Fuzhou 01株)为制苗种毒。病毒经Marc 145细胞增殖、超速离心浓缩、甲醛灭活后,分别制成新型佐剂IMS1312灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗,两种疫苗病毒含量约为108.0TCID50.mL-1。30头25日龄的PRRSV抗体阴性的断奶猪被随机分成5组,每组6头,用于检测疫苗的安全性和免疫原性。结果表明两种疫苗首次免疫断奶仔猪后14 d可以检测到抗体,二免14 d抗体水平达到高峰,一免180 d后抗体水平可以维持在1∶320。两种佐剂苗在4℃放置12个月均不分层,并对断奶仔猪具有良好的安全性和免疫原性。     

陕西省猪伪狂犬病流行病学调查和WG株的分离鉴定

应用gE-EL ISA法对陕西省部分地区6个集约化猪场的187份猪血清进行了伪狂犬病毒(P seu-dorab ies v irus,PRV)野毒感染检测,并对疑似伪狂犬病发病仔猪的内脏及脑组织进行了病毒分离鉴定。结果显示,陕西省猪PRV野毒抗体平均阳性率为28.76%,最高为48.98%,最低为0;分离毒株可致PK-15细胞出现典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20 h左右;细胞培养物和病料混悬液接种家兔均出现典型奇痒症状,PCR反应扩增出PRV gE基因中长度为612 bp的特异性片段。表明本试验分离的病毒为PRV,并将其命名为PRV W G株。     

禽流感病毒H9N2亚型HA基因的序列分析

试验对1株H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆,然后对毒株的HA基因进行阳性克隆鉴定。测序结果表明:所扩增的HA基因全长1 683 bp,编码560个氨基酸;该毒株的裂解位点的氨基酸序列为R-S-S-R,属于低致病力毒株,该毒株有7个潜在糖基化位点,受体结合位点的氨基酸分别为YWT-NVLY,左侧壁氨基酸为NGQQG,右侧壁为GTSKA。将该毒株与国内一些参考毒株的HA基因序列进行比较分析,结果表明,核苷酸与氨基酸同源率较高,核苷酸同源率为93.0%~97.3%,氨基酸同源率为95.4%~96.6%,亲源关系比较近;与韩国毒株核苷酸和氨基酸同源率分别为83.3%和87.3%,亲源关系比较远。     

用同步辐射X-射线荧光分析法研究感病烟草单细胞内微量元素变化

用同步辐射X－射线荧光分析（SRXFA）技术分析植物单细胞的微量元素，研究病毒侵染植物后植物单原生质体内微量元素的相对变化。用果胶酶和纤维素酶分离烟草叶肉细胞原生质体，经3％戊二醛固定30min后，置于杜乐膜上，干燥后用同步辐射X－射线荧光法分析。X－射线流强大于80mA时，停留取谱时间20min,可从烟草单个原生质体中检测到Cl,Ca,Mn,Fe,Cu,Zn,Cr,Co,Ni,As,Ti和Ge。流强低于80mA时，只可检出Cl,Ca,Fe,Cu,Ti和Ge。结果表明烟草被烟草花叶病毒感染后，Ca,Fe离子的强度下降，Cl,Cu,Ge离子变化不显著。其他离子因响应值过低无法比较。     

用非放射性的Digoxigenin标记的DNA探针检出马立克病病毒DNA

用非放射性的Digoxigenin标记的Ⅰ型马立克病病毒特异性DNA探针,杂交反应可有效地检出通过Southern blot及Dot blot固定到硝酸纤维膜上的同型病毒的DNA,其特性及敏感性均不低于放射性~(32)p标记的相同DNA探针。     

Performances and Germplasm Evaluation of Quantitative Resistance to Soybean Mosaic Virus in Soybeans

A sample composed of 96 soybean accessions was evaluated for their diseased rate (I),diseased rank (S), latent period (LP) and rate of disease development (R) in order tostudy the quantitative resistance to soybean mosaic virus (SMV) in soybeans. The resultsshowed that the performances of the above four resistance components were significantlydifferent among accessions and that some of the accessions, such as Zhongzihuangdou,Peixian Tianedan, Youbian30 could be infected by four SMV strains, Sa, SC8, N1 and N3,but their I, S, and R were lower and LP longer than most other accessions. These resultsdemonstrated the existence of quantitative resistance to SMV in soybeans. It was foundthat some soybean accessions, such as AGS19 and Lishui Zhongzihuangdou, previouslyidentified as resistant to SMV infection, performed some infection but resistant toexpansion in the present study. In addition, the resistance in Pixian Chadou and HuaiyinQiuheidou might be either qualitative or quantitative. Furthermore, the present studyalso indicated that the resistance spectrum and durability of accessions with quantitativeresistance might be wider and longer than those with qualitative resistance.     

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化

将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中,转化至大肠杆菌Rosetta株,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示,相对分子量约为82 kD,与预期大小一致。Western-blot检测结果表明,融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应。为获取大量ELISA包被用核蛋白,试验还借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、菌密度I、PTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。结果表明:27~32℃,OD5500.3~0.4,IPTG 0.06 mmol/L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件。优化后经扫描分析显示,所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上。经包涵体纯化和亲和层析纯化,可获得纯度较高的GST融合蛋白。