湿法糖基化改性对南极磷虾蛋白质功能特性的影响

[目的]利用糖基化改性提高南极磷虾蛋白的功能特性.[方法]以南极磷虾蛋白质为原料,采用蛋白质溶解性、吸水性、吸油性、乳化性和起泡性评价方法,分析了5种糖基供体基于改性时间对南极磷虾蛋白质-糖复合物功能特性的影响.[结果]与其他糖基供体相比,随着加热时间的延长,南极磷虾蛋白质与葡萄糖反应产物的溶解性(19.00％)、吸油性(16.67 ml/g)、乳化能力(乳化性10.69m2/g,乳化稳定性88.12％)最大.采用葡萄糖与南极磷虾蛋白质通过改性反应所得产物的溶解度和吸油性得到明显改善,泡沫稳定性得到提高.[结论]糖基化改性能够显著改善南极磷虾蛋白质的功能特性.     

猪繁殖和呼吸综合征病毒GP3蛋白粮基化位点突变株的构建及其生物学特性分析

为研究猪繁殖与呼吸系统综合征病毒（PRRSV）GP3蛋白糖基化位点的作用，在弱毒疫苗株HuN4-F112感染性克隆的基础上，采用点突变的方法对GP3蛋N29、N42、N50、N131位进行单点或多点组合突变糖去基化，     

5株H9N2禽流感病毒HA和NA基因遗传演化分析

为了解2014年上海地区鸡群中5株H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的遗传变异特征,以及与疫苗株A/Chicken/Shandong/6/1996和A/Chicken/Shanghai/F/1998之间的遗传距离与血凝特性,对HA和NA进行了测序,结合Gen Bank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明:5株H9N2亚型毒株的HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒特征,5株毒株均属于经典的H9N2 Ck/Bei群系;其NA基因均属于Y280系;这5株病毒的HA1基因与疫苗株A/Chicken/Shandong/6/1996和A/Chicken/Shanghai/F/1998之间的遗传距离均大于7%。此外这5株病毒与以往上海地区分离的H9N2病毒的HA和NA基因同源性,以及HA基因上的关键位点,均存在一定的变化。F3代的HA基因与F1代相比较,均存在糖基化位点的缺失。由此可见,H9N2亚型禽流感病毒毒株在不断变异,而且现有疫苗对分离株的保护性需要进一步的研究,HA上糖基化位点的变化会引起宿主特异性的改变。     

茶黄素与EGCG抑制体内外β-淀粉样蛋白1-42水平及其诱导的神经细胞氧化损伤

通过模拟生理条件体外实验,将β-淀粉样蛋白1-42(Aβ42)与EGCG和4种茶黄素单体分别按照1︰1和1︰5比例进行孵育,采用硫黄素T荧光检测β-折叠结构的生成量,结果表明,EGCG与茶黄素均能明显降低β-折叠结构生成,从而抑制Aβ42聚集;此外,通过建立20μmol·L~(-1) Aβ42诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤模型,将不同浓度的EGCG或茶黄素(10、50、100μmol·L~(-1))处理后,MTT法检测细胞存活率,同时,检测细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)等抗氧化指标,结果表明,EGCG与茶黄素可抑制因Aβ42诱导SH-SY5Y细胞活力下降及氧化损伤。体内实验中,通过10mg·kg~(-1)·d~(-1)的EGCG或茶黄素处理快速老化模型小鼠(SAMP8),10周后检测小鼠血清Aβ42及晚期糖基化终末产物(AGEs)含量,结果表明,EGCG和茶黄素可显著降低SAMP8小鼠血清中Aβ42及AGEs含量。本研究表明了茶黄素和EGCG可抑制Aβ42聚集纤维化及Aβ42导致的神经氧化损伤,从而对阿尔茨海默病具有一定保护作用。     

昆虫与哺乳动物蛋白质N-糖基化修饰异同的比较及其潜在的应用意义

基于过去多年来所积累的关于昆虫蛋白质糖基化修饰的研究成果,对昆虫与哺乳动物的蛋白质N-糖基化修饰途径与分子机制的异同进行了比较分析,同时进一步讨论如何在人们前期研究的基础上,对昆虫杆状病毒表达系统的蛋白质糖基化修饰途径做些改造性工作,以期能够直接利用该昆虫杆状病毒表达系统生产人源化糖蛋白。     

植物糖基化蛋白质组研究技术策略及研究进展

综述了植物糖基化研究的主要策略以及植物糖蛋白质组学研究的最新进展,旨在为更好地开展植物糖蛋白质组研究提供技术线索及研究思路。     

前导肽区域N-糖基化影响骆驼凝乳酶原在毕赤酵母中的分泌表达和热稳定性研究

骆驼凝乳酶原在毕赤酵母中的表达量较低,不能满足产业化需求。为提高骆驼凝乳酶原的表达量,采用定点突变的方法,分别在其前导肽的第11、26、34、35、38、39位氨基酸处引入1个N-糖基化位点,构建成6种骆驼凝乳酶原的N-糖基化突变体：chy11、chy26、chy34、chy35、chy38和chy39,并分别导入到毕赤酵母中进行分泌表达。测定和比较了野生型（wild）和各突变体骆驼凝乳酶原的表达量。Chy34、chy35、chy38和chy39的表达量显著提高,其中chy34的表达量最高。6种突变体均保持前导肽自切割活性。在50 ℃保温8 h,wild酶活完全丧失,而突变体仍有20%~80%的相对酶活,表明6种突变体的热稳定性均显著增强。研究结果为提高骆驼凝乳酶原在毕赤酵母中的表达量和增强热稳定性提供了新的研究思路。     

苦马豆素抑制N-聚糖加工对生殖激素分泌功能的影响

苦马豆素（SW）中毒可引起生殖激素分泌紊乱,其中,促性腺激素是糖蛋白,由N-聚糖糖基化修饰调控其活性和功能。SW是N-聚糖加工过程中ɑ-甘露糖苷酶的抑制剂,而SW如何通过改变N-聚糖加工过程进一步影响生殖激素的分泌功能尚不明确。因此,本试验建立SW染毒妊娠期小鼠模型,利用MALDI-TOF-MS质谱法检测糖蛋白N-聚糖糖链结构的变化,分析N-聚糖加工过程中糖基酶的活性和生殖激素水平及其受体蛋白表达量。随着SW染毒时间的延长,染毒组小鼠垂体前叶糖蛋白的5种复合型N-聚糖糖链结构消失,而新增加3种杂合型N-聚糖糖链结构;N-聚糖糖基转移酶和糖苷酶的活性均显著下降;进一步发现染毒组小鼠卵巢促性腺激素受体、雌二醇和孕酮受体蛋白表达量显著低于对照组,并且生殖激素分泌水平也出现显著下降。SW可显著抑制N-聚糖糖基酶的活性使糖蛋白上N-聚糖糖链结构发生改变,影响促性腺激素及其受体的活性,使其对下游类固醇激素分泌的调控作用失衡,最终导致小鼠妊娠期生殖激素分泌紊乱。     

糖基化修饰对大豆蛋白功能特性的影响

本文阐述了蛋白质糖基化的反应机理及合成方法,详细综述了糖基化修饰对大豆蛋白功能特性的影响,包括溶解性、乳化特性、凝胶特性、热稳定性及过敏原性。并对糖基化改性大豆蛋白的发展前景进行了展望。     

布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测

为研制安全、有效、新型靶向化布鲁菌外膜蛋白疫苗,采用去污剂连续抽提与电洗脱法分离纯化出布鲁菌外膜蛋白,并进行α-D-甘露吡喃异硫氰酸苯酯糖基修饰、佐剂乳化.依据统计学中完全随机实验设计试验,免疫BALB/c小鼠,收集不同时间点血液样品,ELISA法检测血清中IgG和IFN-γ含量.结果显示分离纯化出37.5 kD与47.2 kD的目的蛋白并成功糖基化修饰;纳米颗粒佐剂乳化后的试验用疫苗免疫小鼠,血清IFN-γ水平呈显著升高趋势(P＜0.05);抗体水平略显优势,但差异不显著(P＞0.05).表明试验用疫苗能激发机体的细胞免疫应答,且产生了免疫记忆.本研究为研制布鲁菌新型靶向化疫苗的研发和推广提供了研究依据.