单克隆抗体亲和层析法纯化人白细胞干扰素的研究

本文报道了一种单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的方法。采用本所研制的α－干扰素单克隆抗体亲和层析柱进行了人白细胞干扰素大规模纯化研究，结果表明，其活性回收率平均达１０６．９％，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染法鉴定，白细胞干扰素的大多数活性成分均被吸附和回收，所得的干扰素蛋白成分主要位于分子量１５，０００－２３，０００的干扰素生区域，产品的纯度大大提高；ＥＬＩＳＡ夹心法测定鼠源ＩｇＧ含量小于２０ｎｇ／剂     

N^6—（6—氨基己基）—5‘—磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９－β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤－５＇－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸泉甙，基于核苷的总产率约７０％。     

冬小麦中玉米赤霉烯酮结合蛋白的分离纯化

玉米赤霉烯酮是植物体内源产生的一类小分子生理活性物质，已证明它与冬性植物的春化作用密切相关。本研究应用亲和层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对春化的冬小麦幼苗中的玉米赤霉烯酮结合蛋白进行了分离纯化。供试材料为冬小冬品种燕大1817，种子萌发后在4℃一春化4周，提取幼苗的水溶性总蛋白进行亲和层析。层析基质为琼脂糖凝胶Sepharose4B，配体为玉米赤霉烯酮多聚赖氨酸复合物。总蛋白溶液先经过Sepharose4B结合后，再与连有配体的亲和胶进行反应，然后洗去非结合蛋白；改变洗脱条件，进一步洗涤得到的为玉米赤霉烯酮结合蛋白（ZBP）溶液。研究结果表明，在春化的冬小麦幼苗中存在两种玉米赤霉烯酮结合蛋白，它们的分子量分别为25.4kD和22.9kD。     

谷氨酸脱羧酶亲和层析介质制备

将 Sepharose 4B用环氧氯丙烷活化 ,接丁二胺臂 ,再用环氧氯丙烷活化 ,与谷氨酸的 N- 2氨基偶联。在 N ,N-二环己碳化二亚胺催化下 ,以接臂的胶与谷氨酸的 C- 5和 C- 1羧基基团偶联。结果表明 ,谷氨酸 N- 2氨基偶联和 C- 1羧基偶联的亲和介质对小麦谷氨酸脱羧酶有部分亲和作用 ,洗脱下的酶活低 ,而谷氨酸 C- 5羧基基团偶联的层析介质对小麦谷氨酸脱羧酶有完全亲和作用 ,洗脱的酶活高。谷氨酸能从亲和材料上洗脱掉脱羧酶 ,但它抑制酶活 ,而同等浓度的 4-氨基丁酸和谷氨酰胺梯度洗脱没有作用     

应用磁珠免疫亲和层析法从猪卵泡液中提纯抑制素

采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一条相对分子质量为 32 0 0 0的带 ,SDS PAGE电泳分析发现有两条相对分子质量分别为 14 0 0 0～ 15 0 0 0和 170 0 0～ 180 0 0的带 ,即β、α亚基。     

间接竞争ELISA检测大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白

采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。     

草甘膦N-乙酰转移酶反应动力学研究

草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetytransferase,GAT)是一种能够通过转乙酰基的反应将草甘膦代谢为低毒物质乙酰草甘膦的酶,在抗除草剂转基因作物中具有潜在的应用价值。通过将地衣芽孢杆菌Ba-cillus licheniformis(Weigmann)Chester AB 94036中的草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)基因克隆到大肠杆菌中,获得含有重组质粒pGEX 6p-1-gat的重组菌株。对重组菌株进行诱导表达,经过GST亲和层析纯化,获得约17 ku的目的蛋白。通过酶标仪和连续分光光度分析法,对GAT蛋白进行了酶反应动力学测定。研究表明GAT的催化常数kcat为6.420 min-1,米氏常数KM为1.162 mmol/L,由此得出其催化效率kcat/KM为5.52 L/(mmol.min)。     

N6-(6-氨基己基)-5′-磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５’－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９β－Ｄ呋喃核糖嘌呤－５’－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５′－磷酸腺苷，基于核苷的总产率约７０％。     

饲料中伏马毒素的测定--免疫亲和柱-荧光光度法

利用免疫亲和层析-荧光光度法对饲料中的伏马毒素B2进行测定,测得其相关系数为0.9589,平均回收率为89.22%,各重复之间的变异系数均小于15%,阳性可用HPLC法进行确认,具有高效、快速、准确、安全等特点。     

亲和层析提纯传染性氏囊病病毒

Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ抽洗数次，ＣＮＢｒ活化后，交联高效价的传染性法氏囊高免血清，制备成ＩＢＤＶ的亲和层析柱。将传染性法氏囊病病雏的法氏囊悬液离心后取上清，上层析法４℃过夜，ＫＣＮＳ洗脱，分部收集ＯＤ２８０值较高之数管，负染后电镜观察。