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71.
根癌农杆菌介导的叶用莴苣基因转化系统的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
以叶用莴苣微茎尖为试材,在含有BA和NAA的MS液体培养基上旋转培养,诱导出大量愈伤组织;进一步分化培养,获得大量不定芽并生根;将愈伤组织碎块与根癌农杆菌共培养,对经卡那霉素筛选后所得到的再生植株进行X-Gluc染色,蓝色反应阳性率为80%,表明建立了叶用莴苣愈伤组织基因转化系统。 相似文献
72.
根癌农杆菌对结球白菜的转化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据,以结球白菜的子叶-子叶柄为外植体,采用农杆菌共培养法把外源基因C58/pV11导入结球白菜,在选择最优的转化条件-根癌农杆菌侵染外植体15min,农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入AS,培养基pH为5.2,共培养3d的条件下,获得转基因植株,其中抗性植株的抗草丁膦试验,转基因植株DNA的PCR及PCR-Southern斑点杂交鉴定等结果表明,50%的抗性植株的基因组中有外源基因的整合。 相似文献
73.
黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
通过根癌农杆菌介导,采用叶盘转化法,探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV-CP)基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件。结果表明:适宜的卡那霉素(Km)浓度,根癌农杆菌浓度,根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为35mg/L,D600约0.5,10-15min和2-3d;将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有35mg/L Km的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根,获得了抗Km的番茄再生植株。对再生植株进行再欠离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测,补CMV-C基因已导入番茄再生植株的基因组中。 相似文献
74.
以花椰菜栽培品种“春秋”无菌苗的子叶和下胚轴为外植体 ,在携带 Ca MV Bari- 1基因 的根癌农杆菌菌种 GV310 1的介导下 ,对影响花椰菜遗传转化的诸因素进行了研究 ,建立了较为完善的转化体系 ,其转化率分别达 2 .31%和 2 .5 6 %。在这一转化体系中 ,首先将过夜培养的农杆菌用 MS无机盐液体培养基稀释 5倍或 10倍 ,感染经 2~ 3d预培养的子叶和下胚轴外植体 30 s,然后进行黑暗共培养 1d,外植体经表面灭菌后转接到含 5 0 0mg/ L 羧苄青霉素的分化培养基上。 3周后 ,将分化的不定芽切成 0 .5 cm见方的小块 ,接种在选择培养基上 ,经筛选的转化芽再诱导成苗 相似文献
75.
76.
77.
细菌Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS)是近年发现的一种分布广泛且与细菌致病性密切相关的新型分泌系统,ClpⅤ型ATPase是不同细菌T6SS中均含有的关键保守组分,据推测可能为底物蛋白的分泌提供动力,但对其生化功能尚未进行深入鉴定。在本研究中,我们克隆了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)C58中的ClpⅤ型ATPase基因atu4344并在大肠杆菌中表达,酶学检测证实了其ATPase活性,定点突变分析发现K232/608和E299/675突变体均丧失ATPase活性,表明Walker A模体和Walker B模体与其活性密切相关。这是首次对植物病原细菌T6SS中的ClpⅤ型ATPase进行生化鉴定和突变分析研究。 相似文献
78.
79.
[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(AS)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记,对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2 d,用OD600为0.6的菌液侵染30 min、共培养3 d,卡那霉素100 mg/L,羧苄青霉素250 mg/L,AS浓度100μmol/L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测,结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育,丰富其种质资源,寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。 相似文献
80.