分子生物学技术在松材线虫研究中的应用

根据松材线虫(Bursaphlenchus xylophilus)分子生物学的研究基础,以及基于不同的研究目的,对松材线虫不同DNA区域,包括基因组DNA、线粒体DNA、核糖体DNA和卫星DNA研究做了综述,并分析、比较一些常用的分子生物学技术在松材线虫研究中的适用性,以及在生物防治研究中的进展。     

噬菌体展示三肽囊素模拟肽的研究

本研究分离纯化抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2),利用噬菌体环7肽库筛选抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)结合肽,测定阳性克隆ssDNA序列,并与Bursin序列进行同源性分析,通过ELISA法检测其结合活性和竞争ELISA法检测其抗原性,以Busin为对照,验证阳性克隆(№4)在鸡体内的生物学效应.序列分析表明,"LNXT"短肽序列可能为结合抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的保守序列,但与Bursin无同源性;噬菌体(№1)在序列中含有K、H、G.ELISA和竞争ELISA检测,表明Bursin对阳性克隆1、4、5、6号和抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的结合有一定的抑制作用:生物学活性初步验证表明,阳性克隆(№4)与Bursin具有类似作用,能促进抗体产生,有望成为一种模拟Bursin新型的免疫增强剂.     

CSFV囊膜蛋白E2单克隆抗体识别表(拟)位基序的差异性分析

CSFV囊膜糖蛋白E2是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白.本研究应用抗CSFV(Alfort毒株)E2蛋白的单克隆抗体c2410、WH303及M1669,筛选噬菌体展示的12肽随机肽库,进行表位分析.结果发现:c2410、WH303针对同一线性表位,精确定位于E2蛋白的832～837位氨基酸SPTTLR,是CSFV特异性表位.同时发现WH303识别的2个主要拟位基序:(W)NKPxT、AxWPTA,M1669识别的3个主要拟位基序:DxMRLD、(SL)MPPF、MLLHxxPxL,但在E2蛋白中均未查找到与之相同(似)序列.应用ELISA、竞争性ELISA、免疫印迹分析不同表(拟)位对单克隆抗体的免疫反应性差异,结果发现:(1)c2410对WH303的3个噬菌体拟位(WNKPxT,AxWPxATA,SPSxLR)在ELISA、免疫印迹检测中均为阴性;(2)SPTxLR噬菌体拟位能与c2410、WH303发生特异性结合,且此结合能被病毒抗原阻断;(3)M1669的3个噬菌体拟位(DxMRLD,(SL)MPPF、MLLHxxPxL)在ELISA、免疫印迹中能与M1669发生特异性结合,但此结合不能被病毒抗原阻断.     

黄板诱杀斑潜蝇技术研究

设置黄板诱集成虫是斑潜蝇测报和防治的重要手段.通过在茄果类及瓜类蔬菜田的对比试验,结果表明,柠檬黄色板在贵州诱杀斑潜蝇成虫量是橘黄色、淡黄色板的3倍以上;插板位置,黄板下端高于作物顶部20cm的诱虫量,分别是黄板下端和上端与作物顶部平齐的1.8倍、1.6倍;插板密度,每667m274块的每块诱虫量,分别比每667m245块、27块高31.8%、41.6%.试验为黄板诱杀斑潜蝇的设置技术提供了依据.     

台湾75毛豆病毒病防治技术研究

研究表明,台湾75毛豆病毒病主要由蚜虫传毒而致,其发生与蚜虫的成虫迁飞时间与发生量关系极为密切.若成虫高峰正遇毛豆1、2叶展平期,毛豆上落蚜量大,发生就重.所以早播的重于迟播的,露地栽培重于套播的.防治上应以栽培避蚜为主,药剂防治为辅,才可取得理想效果.     

家蚕肾形卵的荧光差异显示分析

Liang等建立的mRNA的荧光差异显示法 (flourescentdifferentialdisplay,FDD)具有高效、安全、有用信息多等特点。利用这一方法在mRNA水平上探讨了肾形卵 (ki)与正常卵在初期胚胎阶段的基因表达 ,回收了差异片段 10条 ,并对其差异进行了验证。其中之一的片段序列分析表明为低分子量热激蛋白基因 (smallheatshockgene)。     

鹿流行性出血病毒分子生物学研究进展

鹿流行性出血病毒是一种在全世界野生及驯养的有蹄动物中广泛存在的重要病原体.该病毒属呼肠病毒科环状病毒属,有12个血清型,是一种有10个节段(L1-L3、M4-M6、S7-S10)的双链RNA病毒,编码10个蛋白(VP1-7和NS1、NS2、NS3/NS3A).VP7蛋白具有很强的抗原性且保守性最高.VP2与病毒型特异性有关,可诱导产生中和抗体.VP3为群特异性抗原,高度保守,具有亲水性保守区域.非结构蛋白NS1、NS2和NS3/NS3A及其编码序列均相当保守.该病毒的分子生物学诊断技术主要有PCR和核酸探针杂交技术.     

鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统，将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面，并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ФT4-Z1重组，获得重组噬菌体CT-4CCK和西T-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明，CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面，其融合蛋白分子量约30ku和41ku，能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后，抗体浓度显著升高，肉鸡的体重、采食量都有所提高，而料肉比有所下降。结果说明，鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。     

环峡南苜蓿种子生产技术研究

对影响环峡南苜蓿种子产量的磷肥、钾肥、浇水和地膜条件4个因素进行正交组合试验,结果表明: 磷肥、钾肥、磷钾肥互作对种子产量的影响较大,其次为地膜条件、磷肥浇水互作,浇水的影响最小。试验结果和生产成本综合考虑,最适宜的处理组合为:钙镁磷450 kg/hm2+硫酸钾150 kg/hm2+不铺地膜+不浇水。