产苦马豆素疯草内生真菌Undifilum oxytropis原生质体的制备和再生

以产苦马豆素内生真菌Undifilum oxytropis NX-FEL001为供试菌株,研究了培养方式、菌龄、酶解时间和酶解温度等,对U.oxytropis原生质体制备和再生的影响。结果表明,U.oxytropis菌丝在质量分数为10g/L纤维素酶+10g/L蜗牛酶+1g/L溶壁酶组成的复合酶溶液,35℃恒温,80r/min振荡孵育3h左右,原生质体释放量最高;原生质体在YCM培养基上,22℃培养9d可以再生形成菌落,培养15d其再生率可达8.5%;原生质体在YCM培养基上再生后其菌落颜色与野生型U.oxytropis不一致,呈现白色;菌丝形态与野生型U.oxytropis相一致,经检测再生后菌丝仍然能够产生苦马豆素。U.oxytropis原生质体的制备,将为进行疯草内生真菌的遗传转化和基因操作研究提供重要工具,为进一步开展疯草内生真菌合成苦马豆素的分子调控机制奠定了基础。     

木毒蛾核多角体病毒（LxNPV）杀虫剂：Ⅱ.制剂的研制

通过室人工饲毒养虫并结合林间防治木毒蛾，回收病死虫尸，获取毒源，添加各种辅助剂，配制成９０１－１可湿性粉剂和９０１－２乳剂，进行林间大面积防治木毒蛾试验，１０天防治效果达８０％以上。实验表明，丙酮－乳糖共沉法回木毒蛾核多角体病毒，回收率可达８０．１７％。     

辽宁西部半干旱地区油松和樟子松整地造林效果分析

通过分析油松和樟子松整地造林对土壤理化性质的影响及造林成活率的调查,对辽宁西部半干旱地区油松和樟子松整地造林效果进行了试验研究。结果表明:整地比对照提高造林成活率22.4~25.1个百分点,保存率提高18.0~19.5个百分点,整地造林效果显著;造林整地后土壤容重降低6.62%~12.58%,土壤孔隙度增加25.13%~32.89%,土壤全氮提高45.92%~61.60%,速效氮提高7.87%~38.05%,速效磷提高5.02%~36.33%,速效钾提高16.35%~46.22%,不同整地方式均能改善土壤的理化性质。     

3种整地方式下尾巨桉林分生物量动态及其与土壤水分的关系

对3种整地方式下的尾巨桉林分生长和林地土壤水分进行了监测,通过分析各林地的林分单株平均生物量及林地土壤水分的变化,探讨二者的相互关系,以期为合理评估整地对尾巨桉林分生长和水分利用效率的影响提供科学依据。研究结果表明：随着林龄的增长,3种整地方式下尾巨桉林分单株总生物量和各器官生物量均呈增加趋势,其树干和树根所占比例逐渐增加,而树枝和树叶所占比例呈减小趋势。在幼龄期(16个月之前),全垦条件下的尾巨桉林分生长量最大,18个月后带垦的林分生长量最大;3种整地方式下的尾巨桉林地土壤水分的季节变化格局相似,与天然降水分布基本保持一致。3种整地方式中穴垦尾巨桉林地土壤有较高含水率且显著大于全垦和带垦的(P<0.05),全垦与带垦之间差异不显著;3种整地方式下尾巨桉林分单株平均生物量与耗水量之间均呈显著正相关,利用3块林分单株平均生长量及对应时间的耗水量得到了尾巨桉林分单株生长量与林分耗水量的拟合方程。     

不同预处理方法对柠檬桉染色体制片技术的影响

以柠檬桉种子的根尖为研究材料,通过比较了3种浓度的秋水仙素、2 mmol·L-1的8-羟基喹啉、冰水混合物及以不同比例冰水混合物和0.1%的秋水仙素的混合液等预处理,在多个时间梯度对柠檬桉根尖染色体制片的影响进行了研究,结果发现：3种浓度秋水仙素预处理中,0.1%秋水仙素预处理1.5 h的染色体浓缩适中,分散性好,有较多的分裂相;2 mmol·L-1的8-羟基喹啉预处理的染色体均分散性较差,且分裂相较少;冰水混合物预处理12 h 的染色体浓缩适中且分裂相较多,分散程度较好。其余处理时间的染色体浓缩程度不理想,不易进行染色体分析;混合液中2：3比例下的染色体分散性较好,且浓缩程度适中,有较多的分裂相,综合比较结果由优到劣的处理方法为：0.1%秋水仙素预处理1.5 h＞2：3混合液＞冰水混合物处理12 h＞2 mmol·L-1的8-羟基喹啉,其中在上午11：30—12：30取材,0.1%的秋水仙素处理根尖1.5 h,效果最佳。     

飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′的抗体制备及组织定位

【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗（Locusta migratoria）蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础。【方法】首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5′的氨基酸序列,选取LmKnk3-5′的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含BamH I、Hind III酶切位点的引物,以LmKnk3-5′全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5′的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21（DE3）表达菌株中,加入IPTG（终浓度0.5 mmol·L^-1）低温（16℃）诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5′多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性。取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5′蛋白进行组织定位。【结果】通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5′的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD。酶切连接后,成功获得 pET-32a-R1、pET-32a-R2 和pET-32a-R3重组质粒。诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白。将其扩大培养纯化后获得 R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512 000,可满足抗体使用需求。Western blot结果表明,注射dsLmKnk3-5′后飞蝗体壁LmKnk3-5′的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5′抗体特异性良好。免疫组化试验结果表明,表皮蛋白LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁皮细胞及新表皮中均有分布,特别是新合成的外表皮顶端。【结论】成功获得飞蝗LmKnk3-5′多克隆抗体,证明其特异性良好。LmKnk3-5′在飞蝗腹部体壁新合成的外表皮顶端分布较多。研究结果为飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5′功能研究提供了蛋白水平的证据。     

鲤鱼血淋巴细胞培养及染色体制备条件探索

从鲤鱼侧线鳞处静脉采血于含有肝素的一次性注射器中，采用RPMI1640全培养基进行体外淋巴细胞培养。通过对采血后细胞培养时间、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及温度等条件的摸索，建立了较成熟的培养鱼类血淋巴细胞的实验方法。     

捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体的快速制备与再生

为快速获得大量捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体并使其再生,本试验研究了酶质量浓度、酶解温度、菌龄、酶解时间对D.flagrans原生质体产生的影响,以确定D.flagrans原生质体最佳快速制备条件。结果表明,在溶壁酶2mL/L、蜗牛酶8g/L、纤维素酶8g/L时,35℃恒温条件下,酶解菌龄为2d的菌丝7h,捕食性真菌D.flagrans产生原生质体数量最多且能够再生。这为下一步转化并标记和克隆捕食性相关基因奠定了重要基础。     

海滨锦葵块根粉和酶制剂对断奶仔猪生长和免疫的影响

以断奶仔猪为试验对象,探讨海滨锦葵块根粉和酶制剂对断奶仔猪生长和免疫的影响。64头28日龄断奶仔猪随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验I、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂基础日粮添加0．02％复合酶制剂、0．50％和1．00％海滨锦葵块根粉。试验期28d。结果表明,酶制荆和海滨锦葵块根粉对断奶仔猪的日采食量和日增重有提高趋势,但差异不显著（P〉0．05）;与对照组相比,酶制剂和海滨锦葵块根粉对断奶仔猪血清中溶菌酶活性无显著影响（P〉0．05）;有降低血清中TNF-Ⅱ含量的趋势,但差异不显著（P〉0．05）;与对照组相比,酶制剂可以显著降低IL-6含量（P〈0．05）,海滨锦葵块根粉也降低了IL6含量,但差异不显著（P〉0．05）;与对照组相比,酶制剂组、0．50％和1．00％的海滨锦葵块根粉组的猪瘟疫苗抗体效价分别提高了15．27％（P〉0．05）、18．18％（P〉0．05）和5I．64％（P〈0．05）。结果提示,酶制剂与海滨锦葵块根粉对断奶仔猪生长性能有提高趋势,同时也可以提高断奶仔猪的机体免疫力。     

鲍内脏酶的研究及其应用前景

皱纹盘鲍是我国北方海珍品的主要养殖种类，其特殊的生长习性、营养及药用价值说明它的消化能力强，体内具有活性强的酶。近年来，鲍内脏酶的研究越来越为人们所重视，特别是鲍内脏中的褐藻酸酶、纤维素酶、琼脂酶的研究和应用。本文主要研讨鲍内脏酶的组成、制备法及其应用前景。