囊素对猪口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用

用提取的天然囊素（10ug／mL）和O型口蹄疫灭活疫苗协同免疫45日龄仔猪，研究了其对。型口蹄疫灭活疫苗免疫效果及仔猪增重的影响。将32头健康45日龄仔猪随机分为4组，0．5mL疫苗＋囊素免疫2次（Ⅰ）组、1、0mL疫苗＋囊素免疫2次（Ⅱ）组、1．0mL疫苗＋囊素免疫1次（Ⅲ）组和1．0mL疫苗免疫2次（Ⅳ）组（疫苗对照组），用液相阻断酶联免疫吸附试验（LB—ELISA）检测各组猪免疫前及一免后第14、28、42、60、74、88、102d的口蹄疫血清抗体效价并称重。结果。Ⅱ组抗体水平显著高于Ⅳ组（P〈0．01），Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组间差异不显著（P〉0．05）；一免后第60～110d仔猪平均日增重囊素组明显高于对照组（P〈0．05）。结果表明，囊素可以提高口蹄疫灭活疫苗的免疫原性，提高猪增重，促进生长发育。     

法氏囊三肽囊素(Bursin)的研究Ⅰ.抗 Bursin 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以戊二醛法制备ＢｕｒｓｉｎＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｒｓｉｎ－ＢＳＡ结合、不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻抑２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征性阳性结果。     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

合成法氏囊素和LCGF与卵黄抗体对鸡IBD的治疗作用

应用溶血空斑试验和溶血分光光度测定法分析了合成法氏囊素（BS）及其结构类似物－肝细胞生长因子（LCGF）对机体抗体形成细胞的影响，并进一步研究了二者对IBD的治疗作用。结果证明，合成BS和LCGF均能显著提高小鼠抗体形成细胞的增殖，促进小鼠抗SRBC抗体分泌（P＜0．01）。治疗试验表明，合成BS和LCGF或卵黄抗体单独应用，均可显著提高IBD发病鸡群的成活率（P＜0．01）。BS，LCGF单独应用或与卵黄抗体结合的治疗效果均显著高于试验剂量的卵黄抗体（P＜0．01），高剂量的BS能促进病鸡法氏囊损伤的修复。     

三肽囊素抗独特型抗体可变区基因库的建立

利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡，获得抗独特型抗体的产生细胞，从中提取总RNA，经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板，根据鸡抗体重、轻链基因设计引物，进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。     

合成三肽囊素阳性噬菌体模拟七肽的免疫活性初步研究

为探讨三肽囊素(Bursin)模拟七肽的免疫活性及其与Brusin的相关性,本研究根据Bursin阳性噬菌体展示七肽库中筛选得到的氨基酸序列(MTTNLQQ)人工合成该七肽.以ELISA和竞争ELISA检验合成七肽与Bursin在体外的免疫学反应的相关性;比较不同剂量的合成七肽(设定Bursin作为对照)对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗(La sota株)在鸡体诱导的特异性免疫应答的影响.结果显示合成七肽与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)能够特异性结合并且该结合作用可被Bursin阻断;动物试验的结果表明,低剂量(0.09 mg)的合成七肽对疫苗诱导的体液免疫应答的增强作用与Bursin相当,而且高剂量(0.3 mg)的合成七肽对细胞免疫应答具有一定的增强作用.因此,认为七肽序列MTTNLQQ具有与Bursin类似的免疫活性.     

法氏囊素对ND的免疫增强作用及其最佳用量研究

在用新城疫疫苗对雏鸡进行二次免疫的同时,应用不同剂量的法氏囊素给雏鸡注射,然后在不同时间检测雏鸡的HI抗体效价和ANAE^ 淋巴细胞阳性率。结果表明,0．2μg剂量的法氏囊素对雏鸡的体液免疫和细胞免疫增强作用最明显,且日龄越小的鸡作用越明显。     

法氏囊活性肽对鸡传染性法氏囊病弱毒疫苗免疫效果的影响

将不同剂量的法氏囊活性肽 (BS)冻干粉与鸡传染性法氏囊病 (IBD)弱毒疫苗混合 ,对 2 1日龄SPF鸡滴鼻点眼 ,另设免疫对照组和生理盐水对照组 ,于免疫后 7d、10d、14d、2 1d、2 8d、45d、6 0d、75d和 90d采血 ,测定AGP抗体效价 ,并于免疫后 7、14、2 1、2 8d ,每组剖杀 2只 ,计算试验组囊指数与空白对照组囊指数之比 (BBIX) ,免疫后 30d用IBD JS株攻毒。结果表明 :免疫后 7d ,0 48mgBS IBD弱毒苗组AGP抗体阳性率为 5 2 9% ,比免疫对照组高 2 5 % ,BBIX数值也稍大 ;免疫后 45d抗体水平达到高峰时 ,0 96mgBS IBD弱毒苗组的抗体效价比免疫对照组高2个滴度 ,BBIX数值也稍大于免疫对照组。 30d后攻毒 ,各免疫组的攻毒保护率均为 10 0 %。整个试验期间 ,1 92mgBS IBD弱毒苗组的AGP抗体效价及BBIX数值与免疫对照组相比差异不显著。结果表明 :BS在增强机体免疫应答、提高对法氏囊的保护及损伤后的修复作用方面与其剂量有一定的关系。     

法氏囊素在大肠杆菌中的表达及其免疫增强活性

选用大肠杆菌(Escherichiacoli)编码赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)和甘氨酸(Gly)的常用密码子按顺序排列成BS基因:5'-AAACACGGT-3'。连续合成10个BS(BS10)串连基因单链及其反向互补链,通过退火使其复性成双链。BS10基因经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,克隆进表达载体pGEX-6P-1中。获得的重组质粒pGEX-Bur转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,串连的BS10基因获得了高效表达。表达产物经GST亲和层析和胰酶消化处理后,按适当的浓度和新城疫病毒(NDV)混合,免疫90只30日龄的小白鼠。分别在免疫后第7,14和21天,用血凝抑制试验(HI)测定小鼠血清中NDV的抗体水平,结果加入囊素的实验组比不加囊素的对照组HI平均高出22.5个滴度。同样的实验样品免疫100只8日龄SPF(speclficpathogenfree)鸡,15d后实验组的抗体水平比对照组平均高出20.7个滴度。研究结果证实了用大肠杆菌表达的法氏囊素对小鼠和鸡具有免疫增强的作用。     

三肽囊素分子生物学研究进展

综述了三肽囊素分子生物学方面研究近况。三肽囊素作为一种重要的活性物质，其生物学活性和作用机理得到广泛研究，但有关分子生物学方面研究近几年才开始。