GnIH对雄性SD大鼠肝脏脂代谢的影响及机制研究

为探讨促性腺激素抑制激素(GnIH)对雄性SD大鼠肝脏脂代谢的影响,以不同浓度的GnIH(0、1和10μg/100μL,总体积200μL,溶解于生理盐水中)早晚2次定点给SD大鼠腹腔注射。持续注射6周后,观察记录GnIH对雄性SD大鼠的表观影响,并进一步检测血液生化指标、肝脏脂代谢相关蛋白表达以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。结果表明：与对照组相比,腹腔注射不同浓度的GnIH均可导致雄性SD大鼠采食量显著增多(P<0.05),平均日增重显著加快(P<0.05),Lee指数显著增加(P<0.05),血液中甘油三酯浓度显著升高(P<0.05),而高密度脂蛋白极显著下降(P<0.01)。进一步研究发现,腹腔注射不同浓度的GnIH均可使肝脏中脂肪酸合成酶(FASN)蛋白表达显著升高(P<0.05),而激素敏感脂肪酶(HSL)蛋白表达显著降低(P<0.05),脂联素(ADPN)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达均极显著降低(P<0.01),CAAT区/增强子结合蛋白(C/EBP)表达极显著升高(P<0.01)...     

SD大白鼠高脂血症及脂肪肝模型的建立

为了建立SD大白鼠高脂血症及脂肪肝模型,试验将SD大白鼠随机分为2组,分别给予正常饲料、高脂饲料,连续饲喂30 d,测定SD大白鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和胆汁酸,取SD大白鼠肝脏称湿重,计算肝脏指数(肝脏湿重与SD大白鼠体重之比),并取一小块肝脏组织置于10%中性福尔马林溶液中固定,苏木精-伊红染色(H.E.染色),显微镜下进行组织病理学检查。结果表明:与对照组相比,高脂模型组血清TC、LDL-C含量极显著升高(P0.01),高脂模型组血清HDL-C含量极显著降低(P0.01);高脂模型组肝脏指数、第30天胆汁酸指标极显著高于对照组(P0.01)。病理组织学检查结果表明,高脂模型组SD大白鼠肝小叶结构轮廓基本消失,肝细胞形态不规则,大部分肝细胞肿胀呈气球样变,并可见肝细胞空泡变性,部分肝细胞出现溶解性坏死。说明采用高脂饲料饲喂SD大白鼠30 d可出现高脂血症,并且导致肝脏肿大、脂肪肝及部分肝细胞出现溶解性坏死。     

SD大鼠Krt71基因序列的分子克隆

参考大鼠Krt71基因序列,用PCR方法对SD大鼠Krt71基因DNA和cDNA序列进行克隆,获得SD大鼠Krt71基因的8 206bp的DNA序列(GenBank登录号:KF311105)和1 575bp的cDNA序列(GenBank登录号:KF303589),编码524个氨基酸。SD大鼠与国外报道的BN大鼠、小家鼠、家猫、家绵羊、家牛、苏门答腊猩猩和人等7个物种的Krt71基因cDNA序列的同源性分别为99.9%,95.2%,88.5%,87.5%,88.0%,88.1%,88.1%;其编码蛋白的氨基酸序列同源性分别为100.0%,98.9%,92.5%,91.5%,91.3%,91.5%,92.1%。这一结果表明Krt71基因在进化过程中具有较高的保守性,但不同物种之间也具有功能上的特异性。通过比较SD大鼠Krt71基因与GenBank数据库中发布的Krt71基因的序列,本试验发现了6个SNP位点,这些位点位于该基因的内含子序列,没有改变氨基酸的性质,这一研究结果为Krt71基因的SNPs数据库提供了新的内容。     

双氢睾酮诱导大鼠心肌细胞肥大模型的建立

应用胰蛋白酶分次消化法分离乳鼠心肌细胞,以差速贴壁法纯化心肌细胞,α-sarconme-actin抗体免疫细胞化学染色鉴定心肌细胞。心肌细胞在无血清无酚红培养基中培养48h后,用双氢睾酮(DHT)诱导心肌细胞肥大,建立心肌细胞肥大模型。24h后检测心肌细胞肥大的指标心肌细胞表面积;BCA法测定心肌细胞蛋白含量;半定量RTPCR两步法检测心肌细胞肥大的特征性基因—心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF,β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)mRNA的表达。结果显示免疫细胞化学染色显示培养的心肌细胞纯度达到90%以上,心肌细胞分离良好。与对照组相比,10-8 mol/L的DHT能显著的增加心肌细胞表面积、蛋白质含量、ANP和β-MHC基因表达的增加(P0.01),心肌细胞肥大模型建立成功。     

RP-HPLC法测定大鼠排泄物中紫菀酮浓度

建立测定大鼠排泄物中紫菀酮浓度的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),并进行大鼠灌胃给药后的排泄研究。6只大鼠灌胃给药后,按设定时间收集尿液,粪便和胆汁样品,以HPLC-UV法测定样品中紫菀酮含量,以乙腈-0.05%磷酸水(98∶2)为流动相。结果发现灌胃给药之后72 h,原型药物主要由粪样中排出,胆汁中没有检测到紫菀酮;紫菀酮在尿液、粪样和胆汁中的标准曲线分别为Y=20.96X-0.095,Y=6 690.5X-382.3和Y=6 837.7X-32.95,相关系数(r)均大于0.990,回收率大于69.3%,精密度小于13.8%。结论:该方法符合生物样品分析的要求,可用于排泄物中紫菀酮浓度的测定。大鼠灌胃给予紫菀酮后,药物原型主要从粪便中排出,排出时间主要集中在给药后6~12 h。     

3-甲基-4-硝基酚对大鼠肾脏氧化损伤作用的研究

为了探讨3-甲基-4-硝基酚(PNMC)对大鼠肾脏的氧化损伤作用,选择SPF级雄性SD大鼠,随机分为4组(每组10只),设立3个染毒组和1个对照组。染毒组采用皮下注射的途径分别给予每天剂量为1 mg/kg体重、10mg/kg体重和100 mg/kg体重的PNMC,连续5 d。对照组采用同样的途径给予溶剂(PBS+0.05%tween80),最后一次染毒后第24小时剖检取材。称量体重和器官重量,观察肾脏组织病理学变化,检测血清中肌酐和尿素氮的含量,以及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力及丙二醛等抗氧化指标的含量。结果显示,染毒组大鼠体重和日增重出现不同程度的下降;各剂量组大鼠肾脏均有不同程度的病理损伤;100 mg/kg体重组大鼠肌酐浓度显著升高,所有染毒组大鼠超氧化物歧化酶的含量均显著下降,10 mg/mg体重染毒组大鼠总抗氧化能力也显著低于对照组。综上所述,PNMC染毒后血清中超氧化物歧化酶的活性降低,同时伴有总抗氧化能力下降,提示大鼠体内抗氧化系统遭到破坏,导致过多的过氧化物在体内蓄积,从而对大鼠肾脏造成氧化损伤。     

Effects of Intragastric Lycopene on Oxidative Stress of Blood after Exercise SD Rats

The experiment was conducted to study the effects of intragastric lycopene on oxidative stress blood after exercise SD rats.Thirty two SD rats with similar weight(233.40 g±6.21 g) and good health for SPF were randomized into one control groups and three trial groups with 8 rats per group.The control group was gastric fed with edible oil,the trial Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ groups were gastric fed with edible oil intragastric with 10,20,40 mg/(kg·BW) lycopene,respectively.The pre-experiment period lasted for 10 d,and the experiment period lasted for 42 d.Swimming train six days a week and train six weeks,then that blood were collection for determination of oxidative stress after swimming train 11 hours SD rats.The results showed that lycopene concentration of plasma was increased at first and decreased subsequently,after 4 h lycopene concentration of plasma in SD rat was peak.With the increase of intragastric lycopene doses,glutathione peroxidase,total antioxidant enzyme activity and total antioxidant capacity of plasma showed a trend of rising; malondialdehyde content of plasma showed a trend of decrease with the increase of supplemental lycopene dose after exercise SD rats.Therefore,the antioxidant capacity of blood after exercise SD rats and doses of intragastric lycopene were dose dependent,antioxidant capacity of blood after exercise SD rats showed a trend of rise with the increase of lycopene dose.     

神经节苷脂对脑瘫大鼠大脑皮质区Nestin、NGF表达的影响

目的 观察神经节苷脂(GM1)对脑瘫大鼠大脑皮质区神经巢蛋白(Nestin)、神经生长因子(NGF)表达的影响,探讨GM1促进脑瘫神经修复的可能机制.方法 选择出生10周雄性SD大鼠200只,随机分为3组:假手术组60只,脑瘫模型140只,再分为模型组70只,腹腔注射生理盐水;GM1组70只,腹腔注射GM1.分别在术后0～24 h的7个时间点利用酶联免疫法检测大鼠大脑皮质区Nestin、NGF表达情况,并在实验前和后1～4 d观察大鼠的体质量变化情况.结果 (1)大鼠大脑皮质区Nestin表达GM1组0～24 h、模型组0～12 h明显高于假手术组(P＜0.01);GM1组16～24 h明显高于模型组(P＜0.01).(2)GM1组大鼠大脑皮质区NGF表达0～24 h明显高于模型组(P＜0.05)和假手术组(P＜0.01).模型组NGF表达仅0、4、8h高于假手术组(P＜0.05).(3)GM1组术后第1、2天体质量缓慢增加,至第3、4天明显高于模型组(P＜0.05),接近假手术组(P＞0.05),模型组体质量增加不明显.结论 预防性使用GM1是通过增强大脑皮质的Nestin和NGF表达并延长表达时间来发挥其对实验性脑瘫大鼠的神经保护作用.