AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFastBacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP 1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。     

杆状病毒在昆虫中的持续感染

杆状病毒(Baculovirus)是一类特异性感染节肢动物的环状双链DNA病毒,是野外控制害虫种群的重要生物因子,并已被开发为一种生物杀虫剂加以应用。杆状病毒感染昆虫宿主并不一定导致昆虫死亡,其持续感染(per-sistent infection)在昆虫种群中普遍存在,且在某些刺激条件下,持续感染可被激活为增殖性感染并引发病毒流行病爆发。因此,杆状病毒持续感染对昆虫种群动力学以及病毒流行病学的研究具有重要意义。     

重组马传染性贫血病病毒核心蛋白抗原在 A GID 和ELISA中应用的评价

用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒（ Ｅ Ｉ Ａ Ｖ） 核心蛋白（ Ｇａｇ） 和 Ｐ２６ 蛋白, 作为免疫琼脂双扩散（ Ａ Ｇ Ｉ Ｄ） 和酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 抗原。对７６ 份已知马传贫非特异性血清进行检查, 同时与市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒作比较。证明, 用表达蛋白作抗原的 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测结果均为阴性反应, 而用市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 试剂盒检查有５４ 份马血清出现非特异性反应, 市售 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒检查也出现了非特异性反应, Ｏ Ｄ 值比表达抗原 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 高３５ 倍。初步证明在 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法中, 表达抗原优于常规马传贫病毒抗原。     

Comparison of biological activities of natural and recombinant chicken interferon-gamma

In recent years, chicken interferon-gamma (ChIFN-γ) has been identified and cloned from a chicken T cell line. In this study, recombinant ChIFN-γ produced in the baculovirus and prokaryotic (Escherichia coli) expression systems were characterized and their activity was compared to that of naturally ChIFN-γ produced by mitogen-activated splenic T cells. The baculovirus-derived ChIFN-γ protein (Bac-ChIFN-γ) proved to have physiochemical properties and biological activities similar to those of natural ChIFN-γ. Indeed, Bac-ChIFN-γ was able to inhibit the replication of cytolytic viruses in chicken embryo fibroblasts and to activate macrophages, as was determined by nitric oxide production. Levels ranging between 100 and 300 μg/ml of BacChIFN-γ could be obtained in the supernatants of infected insect cells. On the other hand, yields of the E. coli produced ChIFN-γ rarely exceeded 100 μg/ml after purification steps and although it was also able to activate the HD11 macrophage cell line in a specific manner, no anti-viral activity could be demonstrated. Therefore, the baculovirus expression system is an appropriate system for the high-level expression of biologically active ChIFN-γ and will allow further studies of the immunomodulatory and therapeutic effects of this cytokine in vivo.     

利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统

为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统(BmNPV expression system)在重组病毒构建和纯化过程中存在的重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长等缺点,借鉴国外AcNPV Bac-to-Bac快速基因表达系统工作原理,对家蚕BmNPV基因组进行了改造。通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子、插入有细菌转座子整合靶位点、编码LacZα肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体蛋白基因,获得了家蚕BmNPV病毒穿梭载体BmBacm id;并利用供体质粒上的表达盒和细菌转座子以及细菌转座子的基因定位转移作用,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BmN-PV病毒的构建。     

添加营养素提高家蚕杆状病毒生物反应器产率的试验

添食营养素提高家蚕杆状病毒生物反应器产率的研究表明 :添食营养素后 ,可显著促进家蚕的生长发育。以植酸酶为报告基因 ,低浓度的添食处理可提高家蚕杆状病毒生物反应器产率 30 %以上     

昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其应用展望

昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一,已广泛应用于重组蛋白的合成。该系统具有如多角体启动子控制下的高效表达,比较完善的转译后加工修饰,容易从无血清培养上清中纯化,无内毒素污染等特点。杆状病毒表达载体系统研究的最新进展:高强度早期启动子群杆状病毒转移载体的成功合成,以扩大寄主范围和增进重组蛋白稳定性为目的的亲本病毒的改造;通用的昆虫细胞培养基配方的不断优化,特定昆虫细胞株培养基的研制和适用于大规模悬浮培养的无血清培养基的商品化;旨在进行复杂糖基化及提供相对稳定细胞环境的宿主细胞工程;以新标记物(tag)载体和相关亲和层析方法为代表的蛋白质高效纯化方法的进步。昆虫杆状病毒表达载体系统在基础研究、医药卫生和农业上具有广阔的应用前景。     

家蚕肠液对昆虫杆状病毒感染性的影响

用电击法取 5龄第 4天的家蚕肠液 ,加入家蚕核多角体病毒 (BombyxmoriNucleopolyhedrosisVirus)和宿主域扩大的苜蓿尺蠖核多角体病毒 (HybridAutographacalifornicaNucleopolyhedrosisVirus)的多角体或游离病毒粒子 ,分别作用 70min和 4 0min后 ,感染家蚕细胞Bm 5和秋粘虫细胞Sf 2 1,发现病毒粒子已经被家蚕肠液灭活。进一步用BmNPV多角体喂饲 2龄蚕后 ,收集 2 4h内的蚕粪 ,用培养基浸泡后 ,抽提液中亦不含有具感染性的病毒粒子。上述结果说明家蚕肠液对昆虫杆状病毒的病毒粒子具有很好的灭活作用。因而 ,在家蚕核多角体病毒病预防上 ,提高蚕的健康水平、注意起蚕处理和饲养密度、及早发现和隔离病蚕是有效的防治措施。     

不同家系的万氏对虾对对虾杆状病毒抗病力的差异

不同家系的万氏对虾对对虾杆状病毒抗病力的差异郑国兴（东海水产研究所，上海２０００９０）关键词对虾杆状病毒，万氏对虾，抗毒力，家系ＤＩＦＦＥＲＥＮＣＥＩＮＲＥＳＩＳＴＡＮＣＥＴＯＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳＷＩＴＨＢＡＣＵＬＯＶＩＲＵＳ...     

脊尾白虾杆状病毒病研究

脊尾白虾是一种野生的经济虾类，广温，广盐，杂食性，分布面极广，繁殖季节长。我们已在其病虾的肌肉，中肠等组织中发现Ｃ亚群杆状病毒，其形态结构及宿主的细胞病理学特征均与引起中国对虾，长毛对虾，日本对虾等养殖对虾病毒性流行病的Ｃ亚群杆状病毒类同。由此认为，脊尾白虾是我国养殖对虾病毒性流行病病原的常年媒介体。