墨兰品种健叶与感染胶孢炭疽菌病叶的表面结构及氨基酸含量比较

【目的】明确墨兰品种健叶与感染胶孢炭疽菌病叶的叶片表面结构及氨基酸含量的变化,为墨兰品种抗病性利用提供理论依据。【方法】以中感墨兰品种太平洋为样本,利用扫描电镜观察感染胶孢炭疽菌墨兰叶片表面超微结构的变化;以不同感病水平墨兰品种金华山(低感品种)、太平洋(中感品种)和万代福(高感品种)为样本,利用氨基酸自动分析仪检测感病墨兰叶片除色氨酸外其余17种氨基酸含量的变化。【结果】中感墨兰品种太平洋感染胶孢炭疽菌后,叶片表面超微结构发生明显改变,蜡质层破裂,表皮细胞受损,气孔功能渐失,严重影响叶片功能与整体观感。3种不同感病水平的墨兰品种感染胶孢炭疽菌后,氨基酸种类未发生改变,但总氨基酸含量均明显提高,其中以低感墨兰品种金华山提高最多,高感墨兰品种万代福提高最少,3个品种间差异显著;各种氨基酸在不同感病水平墨兰品种间的变化量差异显著,甲硫氨酸(Met)在高感墨兰品种中变化量最大,胱氨酸(Cys)在中感墨兰品种中变化量最大,天门冬氨酸(Asp)、组氨酸(His)和赖氨酸(Lys)在高感与低感墨兰品种中变化量较大,甘氨酸(Gly)和苏氨酸(Thr)在中感与低感墨兰品种中变化量较大,其他10种氨基酸则均在低感墨兰品种中变化量最大;丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、缬草氨酸(Val)、丝氨酸(Ser)、精氨酸(Arg)和苏氨酸(Thr)7种氨基酸是影响墨兰品种感病强弱的主要氨基酸种类。【结论】胶孢炭疽菌侵染影响墨兰品种叶片表面结构和氨基酸含量,营养物质变化量与墨兰品种感病水平高低有关。     

栽培基质及配方施肥对虎雪兰‘霞光’的生长影响试验

通过盆栽方式，采用不同体积混合配比的泥炭、椰糠、陶粒、树皮基质试验，以N、P、K3元素3水平设置了正交施肥试验，测定植株的生长状况、叶片养分及发病情况，分析了不同栽培基质和施肥处理对‘霞光’生长特性的影响。结果表明，混合栽培基质对虎雪兰‘霞光’的生长较单一的基质效果好，以1／4树皮4-1／4泥炭＋1／4椰糠＋1／4陶粒混合基质植株的株高、假鳞茎、叶面积和根系生长效果最佳；外施氮、磷、钾肥最佳组合为N1P2K3，即NH4N03、NaH2P04和KCl含量分别为1．25mmol／L、0．456mmol／L和2．62mmol／L，有利于虎雪兰‘霞光’植株的营养生长，且设施栽培中发病率较低。     

大花蕙兰种子萌发的原球茎在不同培养基上的生长效研究

大花蕙兰的种子在1／2 MS培养基上萌发并生长到直径0．5～1．0 mm后，转接到新的培养基继续生长并进行茎叶和根的分化。试验选择MS、1／2 MS、KC、VW四种培养基，各添加NAA 1 mg／L，pH值5，2。每个培养皿接种原球茎20个，培养温度25℃，光照强度3000 lx。经过90d的培养，期间每隔15d进行称重，计算出原球茎生长过程中质量的增加。结果证明萌发后的原球茎在1／2 MS培养基上生长最佳，其次为MS和KC，VW培养基不适宜原球茎的继续生长。     

建兰花叶病毒检测标准方法的建立

经过2004￣2005两年对上海口岸进境和进境后种植的260个兰花品种上建兰花叶病毒(CyMV)检测方法的研究,分别建立了检测和鉴定兰花上建兰花叶病毒的DAS-ELISA、电镜观察、鉴别寄主反应、RT-PCR和IC-RT-PCR的方法。     

春兰根状茎增殖与分化培养

以10种培养基进行了春兰根状茎增殖培养研究,结果表明,不同培养基对增殖率有明显影响,以White NAA 5 mg/L培养再转入1/2 MS NAA 5 mg/L培养基,可获得较高的平均生长速度,但获得的根状茎总量以2号培养基最多。春兰根状茎的最适增殖条件为:1/2 MS为基本培养基,不加或添加少量NAA,60 d为1个增殖周期;5种培养基分化培养结果表明,根状茎分化受BA浓度影响较大,当BA浓度达3 mg/L时,经45 d培养平均每g根状茎可分化出20个芽,每芽重约0.15 g。活性炭的存在会抑制分化。     

冬凤兰非共生萌发和低温离体保存（英文）

[Objective] The aim of the research was to establish asymbiotic germination and low-temperature in vitro conservation technique system of Cymbidium dayanum by using plant tissue culture technique to realize its rapid propagation and long-term conservation in vitro.[Method] With mature seeds of C.dayanum as explants,different media were selected to establish asymbiotic germination technique system.With protocorms as materials,conservation,resumptive proliferation and plant regeneration conditions were selected to establish low-temperature in vitro conservation technique system preliminarily.[Result] Mature seeds of C.dayanum could germinate after cultured 90 days on MS media as well as "Hyponex 1" media.The germination rate reached more than 98%.Protocorms inoculated in "Hyponex 1" media could be conserved continuously at 5 ℃ in dark for more than 18 months and the survival rate could reach 90%.Conserved protocorms could realize resumptive proliferation culture both on 1/2 MS and "Hyponex 1" media.The seedling-strengthening and rooting media were 1/2 MS media.[Conclusion] This research provided practical basis for in vitro conservation and rapid propagation of C.dayanum germplasm resource.     

春兰菌根真菌的筛选

地生兰组织培养存在移栽无菌苗成活率低、生长缓慢、开花迟缓、花小甚至不开花等问题,这些与缺少共生的菌根真菌有关。用分离自云南保山、大理等地野生春兰菌根中的内生真菌19个菌株接种春兰组培幼苗,经4.5个月的共生培养,兰苗叶色正常,根系生长良好。测定植物生长量,从长势有明显提高的接菌苗进行重分离及菌根的显微结构观察,确定春兰菌根的形成,并筛选出春兰的有效共生菌根真菌为CLB111,CLB113和MLX102。通过接种处理后春兰苗的鲜重增长率分别为70.6%、70.2%、68.6%,而不接菌的对照仅为45.6%,与对照差异达0.01极显著水平。结果表明这3个菌株均为春兰的菌根真菌的优良菌株.     

农杆菌介导的大花蕙兰转ICE1基因

大花蕙兰属热带植物,在北方组培成本很高,从拟南芥的RNA中克隆到耐寒基因(COR)的转录激活因子ICE1,连上CaMV35S启动子构建成植物表达载体pCAM BIA1300-35S.ICEl-poly,通过农杆菌介导的方法转化大花蕙兰.经过抗性筛选、诱导生芽、诱导生苗、诱导生根等过程.获得了70多棵潮霉素抗性植株,PCR鉴定12.9%为阳性.且部分PCR阳性植株通过了Southern检测,确定为转基因植株.     

独占春种子非共生萌发和低温离体保存

独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L LH(水解乳蛋白)1g/L BA(细胞分裂素)0.5 mg/L NAA(生长素)0.1 mg/L CM (椰子汁)100 ml/L AC 2 g/L 蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS LH 0.5 g/L BA 0.5 mg/L NAA 0.1mg/L AC 2g/L 蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS BA 3～5 mg/L NAA 0.2 mg/L AC 1g/L CM 100 ml/L 蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。     

大花蕙兰再生体系建立的研究

[目的]研究并建立大花蕙兰再生体系。[方法]用75%酒精和0.1%升汞进行表面灭菌,以MS为基本培养基,采用L9(33)正交试验设计进行类原球茎增殖的优选,以继代培养40 d后的增殖系数及幼苗分化率为考察指标。[结果]在大花蕙兰离体再生过程中,侧芽是最容易启动的外植体;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AC 0.1 g/L是类原球茎诱导的最佳培养基;1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L是类原球茎增殖和幼苗分化的最适宜培养基;芽分化后,待长至2~3 cm时,小心切下接入1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+GA31.0 mg/L+香蕉泥150 g/L培养基中生根壮苗效果最好。[结论]为规模化生产提供依据。