c-jun对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

本试验用c-junASODNs诱导c-jun基因发生转录后沉默,探讨原癌基因c-jun对仔猪睾酮分泌的作用及可能机制。以2~3周龄长白仔猪为研究对象,采用体外培养体系,研究c-jun对基础状态下和hCG诱导下间质细胞(Leydig cell,LC)睾酮分泌及基础状态下LC增殖及凋亡的影响。结果显示,c-junASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和hCG诱导下睾酮分泌(P0.01)及基础状态下LC增殖(P0.01),当1μmol/Lc-junASODNs时,显著抑制LC的凋亡(P0.05)。结果表明,c-jun在基础状态下还是hCG诱导下均可促进仔猪LC睾酮的分泌,这种作用与c-jun促进LC增殖和凋亡有关。     

Oxidative Stress: Role in Acetamiprid-Induced Impairment of the Male Mice Reproductive System

Acetamiprid has a wide range of influence on physiological functions in mammals. The objective of this study was to examine the effect of acetamiprid on the reproductive function of male mice, and to study the role of oxidative stress in acetamiprid-induced damage to the testes. Fifty adult Kunmin male mice (25-30 g) were divided into five groups (n=10 per group), i.e., control, blank, acetamiprid alone, acetamiprid and vitamin E, and vitamin E alone. All groups were treated for 35 d. The results showed that acetamiprid significantly decreased the body weight and the weight of testosteroneresponsive organs, such as the testis, epididymis, seminal vesicle, and prostate. Furthermore, acetamiprid also significantly reduced the serum testosterone concentration, and decreased sperm count, viability, motility, and the intactness of the acrosome (P＜0.05 for each parameter). The mice treated with acetamiprid had damaged seminiferous tubules and Leydig cells based on the histological structure of testes; there was degeneration of the mitochondria and endoplasmic reticulum of Leydig cells. These deleterious effects of acetamiprid may be mediated by increasing oxidative stress, as acetamiprid increased malondialdehyde and nitric oxide in the testes, reduced the activity of catalase, glutathione peroxidase, superoxide dismutase, and activated p38. The concentration of acetamiprid in the testes was lower than that in liver, so did the concentrations of liver function tests, including aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT) and alkaline phosphatase (ALP), which suggest that male reproductive function may be affected through the indirect action of its metabolites. Vitamin E significantly ameliorated the effects of acetamiprid. We conclude that acetamiprid damages male reproductive function through inducing oxidative stress in the testes.     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验(英文)

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydigcell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydigcell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Taillength)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA %)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA %均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。     

黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因表达的影响

为探讨黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,本试验通过向大鼠睾丸间质细胞的体外培养体系中添加终浓度为20μg/m L的黄芪提取液,利用荧光定量PCR技术研究黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达量的影响。结果:添加终浓度为20μg/m L黄芪提取液的实验组与不添加黄芪提取液的对照组相比,间质细胞内Bax基因表达量显著降低(P0.01),Bcl-2基因表达量无显著差异,Bax/Bcl-2比值显著下降(P0.05)。结论:黄芪在一定程度上能够通过抑制凋亡基因Bax的转录,抑制大鼠睾丸间质细胞凋亡。     

睾丸间质细胞线粒体调控睾酮合成的研究进展

睾丸间质细胞（Leydig cells,LCs）的主要功能是合成和分泌睾酮。在睾丸间质细胞内,以胆固醇为原料,位于线粒体外膜上的类固醇合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）促进胆固醇向线粒体内膜转运,在线粒体内膜胆固醇侧链裂解酶（cholesterol side-chain cleavage cytochrome,P450scc）的催化下生成孕烯醇酮,而后通过光面内质网的羟基类固醇脱氢酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD）和转运蛋白（translocator protein,TSPO）的共同作用合成睾酮。因此,睾丸间质细胞合成和分泌睾酮与线粒体密切相关,线粒体结构和功能的完整性直接影响睾酮的生物合成,而位于线粒体上的StAR和P450scc是睾酮合成的关键调控因子。睾酮能够促进雄性生殖器官发育成熟并维持其功能,对促进蛋白质合成（如肌肉、骨骼及生殖器官的蛋白质合成）具有重要意义。近年来,通过维持线粒体结构完整性和改善线粒体氧化损伤、线粒体生物发生等功能进而促进睾酮的合成已成为睾酮合成机制的研究热点,受到国内外学者的广泛关注。作者介绍了睾丸间质细胞内睾酮合成的分子机制及影响睾酮合成的重要因子,综述了睾丸间质细胞线粒体结构、线粒体氧化损伤、线粒体调控的细胞凋亡和线粒体的生物发生等对睾酮合成的影响,阐述了线粒体与睾酮合成之间的关系,为改善睾丸间质细胞线粒体结构和功能从而促进睾酮合成提供依据,对于深入了解雄性动物的睾酮合成调节和提高雄性动物的繁殖性能具有重要的意义。     

FSH对体外培养间质细胞睾酮生物合成的影响

以酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞为实验材料,研究了FSH对间质细胞睾酮合成的影响。实验结果表明:(1)随着培养时间的延长,间质细胞的分泌功能逐渐开始下降;(2)FSH(20ng/ml)对于d2和d4的间质细胞hCG的结合率,细胞内cAMP浓度均无明显影响;(3)FSH(20ng/ml)对于d2期细胞胆固醇和羟胆固醇的转化也不没有明显的影响。这表明,无论间质细胞处于何种时期,FSH不能通过调节细胞膜上的受体数量调节睾酮的合成,也不能通过影响胆固醇的转运调节间质细胞的功能。     

猪睾丸间质细胞的分离及培养

为丰富体细胞核移植的供体细胞种类,本研究对猪睾丸间质细胞的分离和培养方法进行了系统研究。运用酶消化法和钢网过滤筛选法获得的猪睾丸细胞,呈现圆形、细胞体积较大,培养4~6 h后开始贴壁;培养48 h后,贴壁增殖;培养3~5 d后可形成单层细胞。这一研究结果为研究和建立睾丸间质细胞体外培养体系提供技术方法和试验依据。     

家禽动眼神经副交感核和Cajal中介核至脊髓的直接投射——HRP法研究

采用微电泳导入法和微量注射法,将HRP分别引入脊髓的颈中部、颈膨大部和腰膨大部,逆行追踪了北京鸭、麻鸭、鹅、鸡、鸽子和鹌鹑6种家禽的上位神经元。结果发现：大量标记细胞不仅分布于中脑对侧红核,还分布于双侧的动眼神经副交感核（EW核）,Cajal中介核和中央灰质,少量标记细胞分布于中脑网状结构和中缝核。标记细胞分布数量的规律是：颈中部引入HRP后,出现的标记细胞最多;颈膨大部引入HRP者次之;腰膨大部引入HRP后,出现的标记细胞最少。两种方法的实验结果没有明显的差异。6种动物之间的差异也不显著。各组实验中,在中脑的顶盖没有任何部位出现标记细胞。研究结果表明：家禽的中脑脊髓通路中,除了具有红核脊髓束、网状脊髓束和中缝脊髓束外,还存在着EW核至脊髓的直接传导通路和Cajal中介核至脊髓的直接传导通路。     

IGF-Ⅰ和hCG对山羊睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

采用体外培养山羊睾丸间质细胞的方法,应用ＩＧＦ－Ⅰ和ｈＣＧ进行不同处理,利用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定睾酮含量。结果表明：①３０～４０日龄山羊睾丸间质细胞适宜作为体外培养的材料;②山羊睾丸间质细胞的敏感性随ｈＣＧ的重复刺激而下降;③ＩＧＦ－Ⅰ能够促进睾酮的分泌（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）;④ＩＧＦ－Ⅰ和ｈＣＧ对睾酮的分泌具有协同促进作用（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。