促使鹿茸高产关键技术

选种标准：公鹿，父代年龄3～5年．体型较大，生长较快，配种能力强．受胎率较高，鹿茸产量达3公斤以上：个体表型较大，符合品种特征，生长发育较怏．配种受胎性能较好，无遗传缺陷。母鹿．母代年龄2～10年，受胎率和繁殖成活率     

鸡软骨细胞体外分离培养鉴定以及过表达miR-15a对软骨细胞的影响

为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。     

鹿茸饮品加工技术

以鹿茸血、鹿骨、鹿筋及中草药为原料，加工制成鹿茸血酒、鹿心营养液扣鹿胎养颜液等鹿茸饮品，具有滋补养颜之功效。     

塔河马鹿鹿茸收割技术

塔河马鹿人工养殖的主要目的是收获具有药用和保健价值的鹿茸产品.本文从收割鹿茸前的准备、马鹿的麻醉、茸桩的结扎、鹿茸的收割、茸桩的止血、马鹿的苏醒、收割后马鹿的观察、茸桩止血带的处理等方面总结了塔河马鹿鹿茸收割技术.     

Bcl-2在梅花鹿茸角中的表达

鹿茸角是哺乳动物唯一的失去后还能完全再生的器官,人们对鹿茸角再生的分子机理了解甚少。本试验以梅花鹿为研究对象,通过原位杂交方法对Bcl-2在梅花鹿茸角中的表达进行了研究。结果显示,Bcl-2在梅花鹿茸角表皮层内表达甚微,在茸角真皮层、间充质层及软骨层等处均有表达,但在表达强度上存在一定差异。在真皮层中,Bcl-2在真皮成纤维细胞中有较强的表达,在鹿茸间充质细胞中也有少量Bcl-2的表达;在鹿茸软骨层中,Bcl-2在软骨细胞中的表达量很高,主要表达在增殖区的软骨细胞中。这表明Bcl-2可能在梅花鹿茸角再生过程中起重要的调节作用。     

鹿茸Ca^2＋含量与塔里木马鹿收茸期的关系研究

为了确定不同年龄段塔里木马鹿鹿茸的最佳收茸时间,保证鹿茸的药用价值,试验选取老、中、青3个年龄段的塔里木马鹿各6头,采用火焰原子吸收分光光度法,分别测定不同生茸时期鹿茸中Ca2＋的含量。结果表明：青年组至6月17日鹿茸上段Ca2＋含量增加显著,确定其最佳收茸时间以6月17日为宜;中年、老年组的最佳收茸时期在6月3日左右,三者存在时间差异。     

鹿茸多肽提取分离纯化及药理作用研究进展

鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统组织的再生等药理作用,是鹿茸中最有效的成分之一。文中对鹿茸多肽的提取,分离纯化及药理作用研究进展进行了综述,希望为鹿茸多肽的研究和开发提供参考。     

MiRNA－93－5p 对 VEGF 的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系1）

为了探讨miRNA－93－5p对梅花鹿血管内皮生长因子（ VEGF）的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成cDNA。根据GenBank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3′端非编码区部分序列（3′UTR）特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3′UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA－93－5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明：成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3′UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336 bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。 MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。     

梅花鹿茸可溶性蛋白提取工艺及免疫活性

以梅花鹿茸为原料,采用超声波辅助法提取可溶性蛋白。以鹿茸可溶性蛋白得率为评价指标,通过单因素试验研究提取溶剂浓度、超声提取时间、超声提取功率和液料比对鹿茸可溶性蛋白得率的影响,在单因素试验的基础上进行正交试验,优化提取工艺条件。结果表明：鹿茸可溶性蛋白的最优提取工艺条件为,以pH＝10．00、0．05 mol· L-1的碳酸盐缓冲溶液为提取溶剂,液料比10∶1,超声提取功率200 W,超声提取时间20 min。在此条件下,鹿茸可溶性蛋白得率为36．849 mg· g-1。体内免疫活性试验表明,鹿茸蛋白提取物能够提高免疫功能低下小鼠的单核巨噬细胞吞噬指数、血清溶菌酶质量浓度、血清及肝组织中酸性磷酸酶活力,具有良好的免疫活性。