禽流感病毒M2基因在原核系统中表达及其抗原性分析

M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白，该结构蛋白具有潜在的抗原性，是禽流感病毒的3种表面抗原之一，在机体内不仅能刺激产生抗体，而且能引起CTL反应。由于其氨基酸序列高度保守，因此以M2蛋白作为抗原，可对不同亚型的禽流感毒产生一定的保护性免疫。     

昆虫围食膜蛋白抗体对重组AcMNPV感染性的影响

围食膜(peritrophic membrane,PM)是昆虫中肠前部分泌产生的,它具有保护中肠上皮细胞、阻止病原物的侵染等功能。由于构成围食膜的几丁质、蛋白质、糖蛋白等成分的装配和特殊取向,围食膜是不连续的,其上有“孔洞”。研究表明,颗粒体病毒增强蛋白、荧光增白剂等生物或化学因子能     

重组痘病毒表达裂谷热病毒囊膜蛋白及其免疫原性分析

裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起的烈性人畜共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为Gn和Gc,其中Gn为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究分别构建了表达RVFV囊膜蛋白G(n c)和Gn的重组痘病毒rVV-G (n c)和rVV-Gn。SDS-PAGE、Western blot结果表明分子量分别为56 Ku(Gn)、58 Ku(Gc)左右的重组蛋白在rVV-G(n c)和rVV-Gn哺乳动物细胞获得准确表达[G(n c)裂解为Gn和Gc],并具有特异免疫反应原性。以rBac-G(n c)和rBac-Gn感染的昆虫细胞裂解物为包被抗原,间接ELISA检测血清抗体结果显示,rVV-G (n c)和rVV-Gn免疫小鼠可诱导显著的Gn、Gc特异抗体反应,并且rVV-G(n c)免疫诱导主要保护性免疫原Gn特异抗体反应效果优于rVV-Gn。结果表明,表达全长囊膜糖蛋白重组痘病毒rG(n c)具有作为安全有效的重组病毒活载体疫苗的潜力,为RVF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。     

猪瘟病毒囊膜蛋白基因pcDNA4．0-E重组质粒的构建及其对小鼠的免疫原性

以猪瘟病毒石门株RNA序列为模板，应用RT—PCR方法，克隆得到猪瘟病毒囊膜蛋白E0-E2 cDNA全序列，并将其与真核表达质粒pcDNA4．0定向连接，构建了重组质粒pcDNA4．0-E。经提纯后，给试验组小鼠后肢胫前肌注射pcDNA4．0-E，每只100μg，15d后再注射1次，同时设空白对照组。于二免后第10、20、30d分别扑杀小鼠，进行免疫小鼠脾和外周血淋巴细胞的转化增殖试验，并用间接ELISA法检测血清抗体水平。结果显示，与空白对照组相比，所构建的重组质粒能够极显著增强小鼠脾细胞和外周血淋巴细胞的增殖（P〈0．01），血清抗体水平从二免后的第10d开始逐渐升高，且极显著高于对照组（P〈0．01）。说明该重组质粒能够诱导小鼠产生特异性免疫反应。     

家蚕蛹表达对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白Vp28和Vp19的免疫原性

以重组杆状病毒HyNPV—Vp28和HyNPV-Vp19感染的家蚕蛹研制成白斑综合征病毒（WSSV）囊膜蛋白rVp28和rVp19亚单位疫苗，并对克氏原螯虾持续口服免疫75d，观察其对WSSV的抗病保护能力。免疫35d后进行口服攻毒．rVp28、rVp28＋rVp19疫苗组的累积死亡率与对照组比较差异显著（P〈0．05），免疫保护率（RPS）均达59．26％；注射攻毒后，rVp28疫苗组的累积死亡率比阳性对照组降低40％。第2次口服攻毒，rVp28、rVp28＋rVp19疫苗组呈现显著的保护作用，RPS分别达到63．16％、68．42％；第2次注射攻毒，各疫苗组的累积死亡率比对照组降低30％。对免疫组存活虾的胃、肠和肝胰腺组织进行病毒的原位杂交检测均呈阴性反应，而对照组死亡虾的组织都呈阳性反应。结果表明．家蚕蛹表达的病毒囊膜蛋白具有较好的免疫原性，rVp28或者与rVp19合并口服免疫能诱导螯虾产生显著的免疫保护作用。     

羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因克隆及表达

用特异性引物扩增羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因，与不同的表达载体重组后用DIG标记的特异性DNA探针进行Dot-blotting和Southern blotting杂交检测，挑选出能稳定传代的重组菌9株。经IPTG诱导后，用光敏生物素标记抗囊膜蛋白IgG进行western blotting分析，检测到能高水平表达的重组菌pGEL-4A，每升培养液中所表达的病毒囊膜蛋白达560mg。     

PEDV膜蛋白基因RT－PCR最适反应条件的确立

以猪流地性腹泻病毒（PEDV）的RNA为模板，探讨了影响猪流行性腹泻病毒（PEDV）的RT－PCR反庆的各种因素，确立了RT－PCR的最适瓜应条件。     

不同浓度NaCl对^14C—Glu向大麦幼苗质膜,液泡膜和类囊体膜蛋？…

用含不同浓度ＮａＣｌ的Ｈｏａｇｌａｎｄ溶液培养６天龄大麦幼苗,同时向心叶滴加５０μｍｏｌ／Ｌ ＡＢＡ和叶片饲喂＾１４Ｃ－Ｇｌｕ。结果显示,５０～１００ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ促进了＾１４Ｃ－Ｇｌｕ向质膜蛋白掺入,５０～２００ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ促进了＾１４Ｃ－Ｇｌｕ向液泡膜蛋白的掺入,其中对向根系液泡膜蛋白掺入的促进作用更显著。５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ对＾１４Ｃ－Ｇｌｕ向叶片类囊体膜蛋白的掺入没     

山羊抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与ELISA鉴定

猪屠宰后,迅速采取其皮下脂肪在３７℃下的膜提取液中的匀浆,于３７℃温箱中孵育３０ｍｉｎ后,用差速离心法和高速离心法提取脂肪细胞膜蛋白,并作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析脂肪细胞膜蛋白与其它组织细胞膜蛋白 差异。从电泳图上看出,脂肪细胞有很多特异膜蛋白,也有一些与其它组织细胞膜蛋白相似的条带。膜蛋白与佐剂充分乳化后主动免疫３只山羊,免疫后７０ｄ取因清,用ＥＬＩＳＡ检测抗体效价为１：６４００。同样,用ＥＬＩＳＡ测定抗体与其它组织细胞膜的交叉反应,结果显示：抗猪脂肪细胞膜抗体与其它组织细胞膜有交叉反应,但反应性不高。     

绵羊肺腺瘤病毒真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env引起体内和体外细胞发生的转化

本试验旨在进一步全面研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白ENV的功能。使用本试验室已构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染NIH3T3细胞,并将此NIH3T3细胞接种到裸鼠体内;重组质粒经尾静脉注射到幼龄BALB/c小鼠体内。结果显示,真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env引起NIH3T3细胞发生转化,转染细胞接触抑制性消失,并形成大量的转化灶;pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染的NIH3T3细胞接种裸鼠使裸鼠致瘤,即引起NIH3T3细胞发生癌变。JSRVenv基因在小鼠体内表达,肝脏细胞出现大面积弥散性坏死,脾脏白髓严重坏死,心肌细胞明显颗粒样变性,肺间质细胞增生,肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性。结果表明,绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白可以引起鼠NIH3T3细胞发生转化和癌变,使小鼠各脏器出现不同程度的病变。本试验为进一步探索JSRV ENV的致瘤机制奠定基础。