兔肝细胞的体外培养(简报)

本实验建立了肝细胞体外培养的二种方法。①组织块-细胞培养法:取7～10日龄兔新鲜肝脏,剪成1 mm~3的组织块,洗涤后种植于培养瓶中,加入含5%胎牛血清(FCS)的199培养液,待组织块周围长出大片肝细胞时。用0.25%胰蛋白酶(含0.03%EDTA)消化液分离肝细胞,并进行传代,得到较纯的肝细胞。②肝细胞直接培养法:0.5mg·mL~(-1)胶原酶     

乌鳢消化系统蛋白酶活性研究

测定了乌鳢［Ｃｈａｎｎａａｒｇｕｓ（Ｃａｎｔｏｒ）］消化系统５种组织和肠内含物总蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的活性分布及胃蛋白酶和肠粘膜蛋白酶的部分理化特性。结果表明：总蛋白酶活性以肠系膜为最高，肝脏最低；胰蛋白酶活性由高到低顺序是幽门垂粘膜＞肠粘膜＞胃粘膜＞肠内含物，肠系膜内未检出胰蛋白酶；糜蛋白酶活性由高到低顺序是胃粘膜＞幽门垂粘膜＞肠粘膜＞肠内含物＞肠系膜。胃蛋白酶和肠粘膜蛋白酶活性最适ｐＨ分别为２．８和７６，肠粘膜蛋白酶活性的最适酪蛋白质量分数为１０％。     

Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂研究进展

阐述Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBI)的分子结构、作用机制,并对其在医药领域、饲料工业及植物抗虫害等方面的研究进展进行了综述和展望.     

胰蛋白酶基因的系统发育分析

下载NCBI数据库中的动物胰蛋白酶基因的氨基酸序列,用CLUSTAL X2程序进行序列比对,用MEGA3.1软件中的Neighbor-joining法构建系统发育树.序列分析表明,胰蛋白酶氨基酸有多处保守基序,且保守性较高,最典型的保守序列有催化三联体结构:His(组氨酸)-Asp(天冬氨酸)-Ser(丝氨酸)以及金有6个保守的半胱氨酸形成3对肽内二硫键.另外,此序列还具有特异性的底物结合位点,这就决定了胰蛋白酶的专一性.系统发育分析结果显示,脊椎动物与无脊椎动物被分成2个大的分支,而脊椎动物中trypsinX3物种被单独分为一支,这表明typsinX3物种与脊椎动物的同源性较低.     

东北三省栽培大豆(G.max)种子蛋白中Ti和SP_1位点等位基因频率及分布

1987～1989年,用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了东北三省的2277份栽培大豆种子蛋白中胰蛋白酶抑制剂(Ti)和β—淀粉酶(SP_1)位点的等位基因型。检测结果:Ti位点,Ti~a型共2267份,占总检测品种数的99.56％,Ti~b8份,占0.35％,Ti~c2份,占0.09％,未发现ti型。SP_1位点,SP_1~b2141份,占94.03％,SP_1~a110份,占4.83％,SP_1~(an)12份,占0.53％,SP_114份,占0.61％。     

胰蛋白酶水解法提取肝素工艺参数的优化研究

在单因素试验的基础上,利用三因素三水平试验设计结合响应面法对胰蛋白酶水解提取肝素的工艺参数进行优化研究.通过响应面分析建立了回归模型来分析各因素对肝素的提取率的影响,以及个因素间的相互作用.通过典型性分析得到优化肝素提取条件,优化后的工艺参数为:酶水解温度为55℃;酶水解时间2 h;料液比1∶15,此条件下肝素得率理论值为211.34 mg·kg-1,验证试验肝素得率为206.83 mg·kg-1.     

胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的制备工艺研究

[目的]确定胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的最佳水解条件。[方法]通过交联葡聚糖凝胶柱对标准品谷胱甘肽(M307)与细胞色素C(M12300)混合物的过柱情况,通过扫描,确定过柱液在波长230 nm处有最大吸收,在波长230 nm处测吸光度绘制标准曲线,确定分子量为307~12 300的分子多肽分布。以其为依据,以目的肽段得率作为指标,分别考察了酶与底物比例、酶解时间、pH、温度对胰蛋白酶酶解凤凰衣反应的影响,通过正交试验确定了胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件。[结果]通过试验确定酶解反应的最佳水解条件,在此条件下,可得到最大的目的肽得率。[结论]胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件:酶与底物比例为3%,pH值为8.0,水解温度为55℃,反应时间为3.0 h。此时目的肽段得率为最高值1.845%。     

山合欢种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究

采用去离子水抽提、硫酸铵分步盐析、亲和层析和分子筛层析等方法,从山合欢种子中得到一种胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE结果表明,该抑制剂由2条多肽链构成,分子量分别为14.5和5.5 kDa.MALDI-TOF测定该抑制剂的精确分子量为19768.23 Da.该抑制剂能与胰蛋白酶形成1∶1的复合物,并且它们的结合不受SDS的影响.该抑制剂的肽指纹图谱中有7个主要的信号簇.通过串联质谱测定该抑制剂的部分氨基酸序列,比对发现与其他Kunitz蛋白酶抑制剂有较高的同源性.     

肉仔鸡对胰蛋白酶抑制因子的耐受性研究

给15日龄AA肉仔鸡分别饲喂胰蛋白酶抑制因子(TI)9.01,6.45,3.74,1.80,1.39,0.34g/kg的日粮至35 d.肉仔鸡对饲粮中胰蛋白酶抑制因子的耐受性阈值为3.74g/kg.     

农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（cpti）在玉米中的遗传转化

在众多玉米转化方法中,农杆菌法是很有发展潜力的手段之一,它具有诸多优点:操作简便,一次性处理材料量大,成本低,可转化的外源DNA长,且外源基因大多为单拷贝插入.