RT-PCR法快速鉴别新城疫强弱毒株的试验

通过对大量不同毒力NDV F基因核苷酸序列的分析，根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物，建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，整个试验过程可在5h内完成。试验表明，该方法具有快速特异和操作简便的特点，不仅适用于对鸡胚毒的检测，而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测，是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。     

优良浆意蜂DNA分子特异标记(W316bp)的鉴定研究

第一部分分离提取三品系意蜂 (浙农大、萧山、平湖 )的DNA ,使用紫外分光光度计 ,波长 2 6 0nm鉴定DNA纯度 ;第二部分以W (5′ -CGGCCCCGGT - 3′)为随机引物进行PCR ,扩增 ,电泳 ,获得DNA多态性图谱 ;第三部分比较三品系意蜂工蜂与雄蜂的DNA多态性图谱。结果凡是三品系意蜂的工蜂均出现一高产浆特异标记W316pb条带 ,但三品系意蜂的雄蜂均无W316bp条带。则进一步鉴定了W316bp是高产浆意工蜂DNA分子的特异标记     

多重聚合酶链式反应鉴别新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体研究的概述

新城疫 (ＮＤ)、传染性支气管炎 (ＩＢ)、传染性喉气管炎 (ＩＬＴ)和鸡毒支原体 (ＭＧ)是四种严重危害养鸡业发展的常见呼吸道传染病 ,在世界许多国家广泛流行。这几种鸡呼吸道传染病的流行病学、临床特征和病理变化十分相似。临床上 ,一个鸡群同时感染二种上述呼吸道传染病病原体的现象也常有发生。常规的病原分离鉴定、血清学方法难以对两种上述病原混合感染的鸡呼吸道传染病作出快速鉴别诊断。聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术具有快速、简便、特异及敏感等特点 ,近年来在禽病诊断中已得到了广泛应用。但常规ＰＣＲ技术一次扩增只能诊断一种…     

应用固相聚合酶延伸反应的基因芯片检测技术

将5‘末端为氨基修饰的寡聚脱氧核糖核苷酸片段点样于硫氰基修饰的玻片表面，制备成5‘端氨基与玻片表面异硫氰基共价交联的寡核苷酸微阵列，并在相应目标序列存在的条件下进行聚合酶延伸反应，结果显示：与目标序列配对的寡聚核苷酸可以延伸产生荧光信号，进一步的实验表明，寡核苷酸3‘末端碱基与目标序列不配对或误配时所产生的荧光信号还不及完全配对时所产生的荧光信号的1／3，从而提供了另一种检测基因位点的变异的技术，与现有的 基因芯片检测技术相比，这种方法不仅结果可靠灵敏，而且简便快速，重复性好。     

家禽传染病的现代分子生物学诊断技术

对于集约化养禽业，在疫病的诊断上要体现“准”和“快”。家禽传染病的常规诊断方法虽然具有许多优点，但其费时、敏感性低、繁琐、漏诊、误诊的缺点也同样明显。随着分子生物技术的不断应用和发展，现代分子生物学技术如核酸杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、核苷酸序列分析和基因芯片等，将在禽病的准确、快速诊断中扮演重要角色。     

应用聚合酶链反应检测山羊关节炎-脑炎前病毒

以CAE病毒同源的MVV1514毒株LTR核酸序列片段作引物，用PCR对不同来源的4株CAE毒株GSM细胞培养物进行扩增，均为阳性。采人工感染CAE病毒的山羊外周血淋巴细胞进行检测，攻毒7天后即出现阳性反应。     

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。     

柿属植物ISSR分析技术的建立

以部分柿属(Diospyros)植物为材料,对ISSR-PCR反应体系腗g2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶浓度,退火温度及扩增循环次数进行了探讨,确立了适合柿属植物ISSR分析技术体系在25 μL反应体系中,含1× Buffer,Mg2+2.0或2.5 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.6 μmol/L,Taq DNA聚合酶1U,甲酰胺2%,模板DNA 2.4 ng/μL;PCR扩增程序94℃变性3 min;94℃ 30 s,(Tm+2)℃(根据引物不同设定)45 s,72℃1.5 min,35个循环;72℃延伸7 min;2%琼脂糖电泳分离PCR产物.结果为柿属植物遗传多样性和分子系统学研究提供技术支持.     

应用PCR技术检测HBsAg携带者血清中HBV DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例 HBsAg 携带者和58例正常人血清中的HBV DNA 特异性片段,通过与 HBsAg 滴度及 HBV 血清标志物进行对比分析发现 HBV DNA 阳性率与 HBsAg 滴度呈正相关(r=0.981,p<0.005),与 HBeAg 减低,抗-HBe 产生以及其后的 e系统消失过程呈相应递减趋势。并且在单项抗-HBs 阳性的血清中,HBVDNA 检出率可达10%。