植物激素的信号转导系统研究进展

植物激素是调节植物生长、发育和抗逆性的重要物质 .蛋白质激酶的磷酸化级联放大系统在激素的信号转导中起重要作用 .乙烯早期信号转导的 ETR1系统类似原核生物的信号转导的双组分系统 .本文综述了有关植物激素的信号转导系统的研究进展 ,并提出了今后研究的思路     

狂犬病毒CTN株核蛋白基因的克隆与序列分析

本研究克隆了我国狂犬病毒CTN株的N基因，序列分析表明其开放阅读框由1353个核苷酸组成，与我国狂犬病毒疫苗及国外一些固定株进行N基因同源性比较，结果核苷酸序列及其推导的氨基酸序列保守性很高。磷酸化分析表明CTN株N蛋白具有狂犬病毒共有的389位丝氨酸磷酸化位点。本研究还对N蛋白的抗原位点进行了详细分析和讨论。     

5个水稻蛋白激酶的克隆、表达及活性研究

蛋白激酶在生长发育、表达调控、逆境反应、信号传导等几乎所有的生命过程中发挥着重要作用,蛋白激酶的研究具有重要的理论和应用价值。全基因组测序结果表明,水稻基因组中至少有1500个蛋白激酶。本研究利用已有的蛋白激酶序列,通过PCR扩增和重组克隆,将5个重要的蛋白激酶在酿酒酵母系统中进行了表达,它们的编号分别是:NM-189878,NM-194133,NM-190508,NM-197522和NM-197571,其中NM-194133具有较强的自我磷酸化活性。同源性分析表明,这些激酶在水稻中可能的作用包括:碳代谢的生物合成调控、种子形态发生、细胞分裂调控、生物和非生物刺激的反应调控等。这项工作为进一步的体外酶活分析及蛋白质-蛋白质相互作用研究等提供了基础,也为高通量克隆表达水稻蛋白激酶提供了一个有效的系统。     

双向电泳检测奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质方法的建立

为研究不同激素或营养素对乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的影响,本实验建立细胞核磷酸化蛋白质提取方法及双向电泳实验技术。结果表明,细胞核磷酸化蛋白纯化结合双向电泳技术是乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组学研究的有效方法,可为进一步研究乳腺上皮细胞机理提供技术基础。     

植物激素的信号转导系统研究进展

植物激素是调节植物生长、发育和抗逆性的重要物质，蛋白质激酶的磷酸化级联放大系统在激素的信号转导中起重要作用。乙烯早期信号转导的ETR1系统类似原核生物的信号转导的双组分系统。本文综述了有关材料激素的信号转导系统的研究进展，并提出了今后研究的思路。     

温度胁迫对甘蓝蛋白质磷酸化的影响

用SDS-PAGE放射自显影技术以及液闪测定技术研究了2种温度胁迫条件下甘蓝体外蛋白激酶活性变化及其对Ca2+的依赖情况,并进行了温度胁迫磷酸化蛋白的分离.结果表明:甘蓝受到高温(35℃)或低温(5℃)胁迫时,体内蛋白激酶活性在3 min内迅速升高,随着温度胁迫时间的进一步延长而迅速降低,发现温度胁迫下,蛋白激酶对Ca2+具有明显的依赖性.从放射自显影结果来看,2种温度胁迫都会发生分子量为22.9 kD的特异蛋白质体外磷酸化;在逆境温度处理10 min内,磷酸化蛋白质含量较高,随着低温处理时间的延长,磷酸化蛋白质含量迅速下降.     

小鼠cofilin-1基因及其真核表达载体的构建与体内外表达

【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细胞中的表达情况。利用鸡胚活体原位电转的方法,将重组质粒转染胚胎发育第3天(E3)的鸡胚脊髓,在胚胎发育第6天(E6)取材,切片后经免疫荧光染色观察并统计分析重组质粒在脊髓中的表达情况。【结果】克隆并模拟了小鼠cofilin-1野生型、活化型和失活型的cDNA片段,成功构建了pCAG-cfl1-wt、pCAG-cfl1-S3A和pCAGcfl1-S3D3种真核表达载体。体外转染CHO细胞,半定量RT-PCR检测及统计学分析表明,转染重组质粒的CHO细胞中,Cofilin-1mRNA相对表达量与对照组(未转染质粒的正常CHO细胞)存在显著性差异;免疫荧光染色后观察到了Cofilin-1融合蛋白的表达。对经活体原位电转转染重组质粒的鸡胚脊髓切片进行免疫荧光染色,检测到Cofilin-1融合蛋白的表达,且重组质粒转染效果与pCAG-EGFP转染效果无明显差异。【结论】pCAG-cfl1-wt、pCAGcfl1-S3A和pCAG-cfl1-S3D3种真核表达载体的成功构建及其在体内外的高效表达,为进一步研究cofilin-1及其Ser3位点的磷酸化在神经元迁移中的作用机制奠定了基础。     

愈痫灵方对PTZ致痫鼠认知功能障碍与海马p-CREB、CaMK IV表达的影响

目的 分析愈痫灵方对海马磷酸化环磷腺苷应答元件结合蛋白（CREB）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMK IV）的关系和表达变化,探讨愈痫灵方改善戊四氮（PTZ）致痫鼠认知功能障碍的影响。方法 取健康雄性SD大鼠120只,从中随机选取10只作为正常对照组,其余大鼠用戊四氮造模,将符合模型标准的大鼠随机抽取60只分为愈痫灵组、拉莫三嗪组、丙戊酸钠组和模型组,每组15只。灌胃后用水迷宫实验测试大鼠的学习记忆能力,采用免疫组织化学方法检测p-CREB、CaMK IV在海马体CA1区的表达变化。结果 各组大鼠水迷宫实验潜伏期和总路程的学习记忆成绩比较有显著统计学意义（P<0.001）：模型组与正常组比较,差异有显著统计学意义（P<0.001）;拉莫三嗪组、愈痫灵组与模型组比较,差异有显著统计学意义(P<0.001)。愈痫灵方对致痫鼠海马CA1区P-CREB、CaMK IV表达的影响：各组之间表达的比较,差异有显著统计学意义（P<0.01）;模型组与正常组比较,差异有显著统计学意义（P<0.01）;愈痫灵组、拉莫三嗪组与模型组比较,差异有显著统计学意义（P<0.01）。结论 愈痫灵方可以通过增强海马区p-CREB的水平,提高P-CREB的上游通路CaMK IV,改善致痫大鼠的学习记忆能力。     

小鼠卵母细胞体外成熟过程中p34^cdc2磷酸化的变化

通过Western杂交检测了小鼠卵母细胞体外成熟过程中p34^cdc2的磷酸化变化情况。用抗p34^cdc2C末端抗体的杂交结果显示，小鼠卵母细胞体外成熟过程中p34^cdc2表现为上、中、下三条带，其中中带在培养4h出现，并持续增加直到培养16h,在20h有一个下降趋势并在培养24h又回升；上带从0－16h表现为持续下降趋势，20h稍回升后24h又下降；下带在整个培养过程中表现平稳。用特异性识别p34^cdc2去磷酸化的Tyr-15和Thr-14的抗p34^cdc2N末端抗体杂交结果，证明中带为p34^cdc2在Tyr-15和Thr-14上去磷酸化的形式。     

草甘膦的作用机理及部位

研究结果表明，草甘膦除抑制芳香氨酸的生物合成外还抑制莽草酸的生物合成，作用部位在磷酸醇为丙酮酸到莽草酸中间；同时还抑制胡萝卜素、叶黄素的生物合成，作用部位在丙酮酸之后的乙酰辅酸Ａ到类胡萝卜素中间；抑制叶绿素的生成作用部位在珀琥ＣＯＡ与σ－氨基ｒ－酮戊酸中间；作用部位为抑制ＡＴＰ酶的活性。草甘膦高效的杀草能力，应当是它多种作用的综合结果。