弱光逆境对葡萄核酸代谢变化的影响

研究了不同程度的弱光逆境对葡萄幼苗核酸代谢的影响.结果表明:单层和双层遮阳处理均使DNase、RNase活性大幅度上升,DNA、RNA含量下降.DNase、RNase活性上升及DNA、RNA含量下降的幅度均为双层遮阳＞单层遮阳.且单层、双层遮阳处理下DNase、RNase活性的变化与DNA含量、RNA含量之间的变化呈显著相关.     

猪2型圆环病毒核酸疫苗的研制及其对小白鼠的免疫效果

为研制猪2型圆环病毒（PCV2）新型核酸疫苗，以pcDNA3为载体，与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接，分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后，以每只小白鼠0．2mg免疫5周龄左右的雌性小白鼠，然后用ELISA检测免疫小白鼠血清中抗体的产生情况。结果显示，这5种真核表达质粒均能刺激小白鼠产生特异性抗体，但相比之下，真核表达质粒pcDNA3-V1-V2诱导小白鼠产生的抗体水平更高，维持的时间更久。表明质粒pcDNA3-V1-V2的免疫效果较好，有望成为防制猪2型圆环病毒的候选疫苗。     

猪细小病毒分子生物学与核酸探针的研究进展

猪细小病毒( Porci ne parvovi rus,PPV) 是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,近年来PPV感染呈扩大上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。各国的研究者加强了PPV基因组结构和蛋白质的研究。随着分子生物学的发展,核酸探针以其敏感性和特异性成为快速诊断PPV的一种方法。     

禽流感病毒H7亚型血凝素单克隆抗体的制备

本实验用核酸疫苗免疫BALB/C小鼠.取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经三次克隆和间接ELISA筛选,获得ⅠA3、ⅠB3、ⅠC4和ⅠF7四株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价范围是:细胞培养上清1:160～1:640,腹水为1:5×104～1:4×105;经ELISA法测定,四种单克隆抗体仅与试验的H7病毒株反应,而不能与禽流感H5亚型病毒、禽流感H9亚型病毒等反应;单抗的亚类鉴定结果表明,ⅠA3、Ⅰ B3、ⅠC4分泌的抗体为IgG1亚类,ⅠF7分泌的抗体为IgG2b亚类.     

转基因植物疫苗研究进展

自十八世纪末期首次用疫苗预防疾病以来,疫苗已成为目前预防疾病最有效的的手段之一.近年来,随着基因工程、蛋白质工程以及免疫学理论与技术的迅速发展,以开发新型高效疫苗为目标的新的研究领域异常活跃,使传统的疫苗生产方式发生了根本性的变化,基因工程亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗等已成为科学家们的关注热点.     

细菌CpG DNA对鸡接种禽流感病毒H9亚型灭活苗的免疫增强作用

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ,大肠杆菌牦牛株核酸作为佐剂 ,免疫接种于试验鸡 ,用 XTT法检测 T、B淋巴细胞增殖反应 ,并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示 ,在细菌核酸佐剂组 ,鸡的血凝抑制抗体水平和 T、B淋巴细胞增殖反应均显著高于抗原单独免疫组 (P<0 .0 5 ) ,而免疫组均显著高于空白组 (P<0 .0 5 ) ;细菌核酸佐剂组的抗体滴度峰值略高于白油佐剂组 (P>0 .0 5 ) ,但 T、B淋巴细胞增殖指数峰值显著高于白油佐剂组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,大肠杆菌牦牛株核酸可显著增强免疫鸡对禽流感病毒 H9亚型灭活疫苗的免疫反应 ,其免疫增强效果略高于常规油佐剂     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是20世纪90年代发展起来的一种新型疫苗，它应用现代生物工程技术和分子生物学技术，克服了传统疫苗所存在的一些缺陷，具有传统疫苗不可比拟的优点，已成为国内外科技界争相研究的热点之一，呈现出良好的发展势头和应用前景。本文对核酸疫苗的研究概况、核酸疫苗的组成与制备、作用机理及安全性等问题进行了综述。从而使读者了解国内外该方面的研究动态，掌握最新的研究动态和方法、拓宽研究思路。也可以启发使用者发现问题和提出问题，进而使研究人员寻求新的研究方向。     

猪圆环病毒2型地高辛标记探针检测方法的建立与应用

根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列,在ORF2内设计1对特异性引物,利用PCR反应扩增出371 bp的核酸片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,建立了地高辛标记核酸探针诊断PCV-2的方法。该探针与8个PCV-2重组菌的核酸抽提物均能发生特异性杂交,而与对照猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)的核酸杂交均为阴性;对PCV-2 DNA的最低检测量为10 pg。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白和SEA共表达核酸疫的构建及鉴定

构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）M蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）共表达的核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。将采自长春患PRRS病猪的组织剪碎充分研磨,提取病毒RNA后,用RT-PCR的方法特异性扩增PRRSV长春株的ORF6基因（M蛋白）片段。将该片段定向插入到载体pKS-SEA上,双酶切获得片段SEA-ORF6,再将其克隆到真核表达载体pVAXI中,构建重组质粒pVAXI-SEA-ORF6,转化大肠杆菌。经酶切鉴定后,将构建的阳性重组质粒在BHK细胞中表达。通过间接免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性,用Western blot分析表达蛋白的特异性。结果表明,所构建的重组质粒pVAXI-SEA-ORF6在BHK细胞中得到了表达,为进一步研究PRRSV基因工程疫苗奠定了基础。     

CpG-ODN增强表达犬瘟热病毒H蛋白重组质粒免疫效果的分析

为提高犬瘟热病毒（caninedistempervirus,CDV）重组质粒的免疫应答水平,合成4条CpG-寡脱氧核苷酸（CpG—oligodeoxynueleotides,CpG-ODN）;通过体外淋巴细胞增殖试验确定1条刺激活性最显著的CpG-ODN,序列为5＇-TCGTcGTTTTGTCGTTTTGTcGTT-3’。将30只缝康毕格犬随机均分为2大组,每大组再分为5小组,分别以不同的剂量肌肉注射CDV附着蛋白（H）重组质粒pcDNA—H和选定的CpG-ODN。在免疫后的第2、4、6周分别测定各组动物的抗CDV中和抗体和γ-干扰素水平。结果表明选定的CpG-ODN对提高抗CDV中和抗体效价和干扰素水平具有一定作用,且与对照组差异显著（P〈0．05）;但不同剂量的质粒pcDNA—H和CpG-ODN的效果不同,其中以30μg／只的CpG-ODN和50ug／只的pcDNA—H的剂量组合效果最佳。以选定剂量的CpG-ODN和pcDNA—H免疫5只健康毕格犬,同时以质粒pcDNA—H与生理盐水作为对照;4周后所有动物均接种CDV组织匀浆毒。结果发现试验组动物均未出现犬瘟热临床症状,且攻毒后第3周CDV检测为阴性,而peDNA—H对照组和生理盐水对照组动物的CDV检测阳性率为2／5和5／5;这表明CpG能够明显促进重组质粒pcDNA—H的免疫保护作用。