Screening of the Reference Genes for the Study of Peripheral Blood Mononuclear Cells by Quantitative Real-time PCR in Min Pigs

Min pig is a local pig breed in Northeast China. It has been well-adapted to the local cold weather,but few genes related to its environmental adaptation have been studied. For studies about environmental adaptation of Min pig on molecular level,it is important to have proper reference genes for quantification of gene expression by quantitative Real-time PCR. In this study,12 reference genes (B2M,ACTB,RPL11,RPL4,YWHAZ,GAPDH,HPRT1,SDHA,HMBS,IDH3B,TUBB2B and TBP1) were evaluated for their potential as the reference gene in Min pig peripheral blood mononuclear cells under different temperatures. Blood samples were collected from 3 Min pigs which were under -25,5,10 and 30℃,respectively. Mononuclear cells were separated using density gradient centrifugation. Statistical algorithms including geNorm,Normfinder and BestKeeper were employed to assess the stabilities of these genes. Analysis of geNorm and Normfinder revealed that all these 12 genes were highly stable. However,ACTB,GAPDH,SDHA,HPRT1,TBP1 and YWHAZ genes (SD<1) were found to be more stable than other six genes (SD>1),of which TBP1 was the most stable one using BestKeeper program. To summarize,ACTB,GAPDH,SDHA,HPRT1, TBP1 and YWHAZ genes were suitable to be the reference genes,with TBP1 was the best one.     

民猪外周血单核细胞实时荧光定量PCR内参基因的筛选

民猪是能够适应东北地区寒冷环境的地方猪种,但目前对其环境适应性相关基因的研究较少,也没有确定适合此研究所需的实时荧光定量PCR的内参基因。因此,本试验通过研究常用的12个内参基因（B2M、ACTB、RPL11、RPL4、YWHAZ、GAPDH、HPRT1、SDHA、HMBS、IDH3B、TUBB2B和TBP1）在不同环境温度下民猪外周血单核细胞中的表达稳定性,旨在确定合适的内参基因进行相关研究。分别在-25、5、10和30℃采集3头民猪耳静脉血分离出单核细胞,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper 3种软件分析12个候选内参基因的Ct值,筛选出表达稳定的基因作为内参基因。经geNorm和NormFinder计算获得各候选基因的M值发现,12个候选基因的表达均相对稳定,而BestKeeper的分析则显示ACTB、GAPDH、SDHA、HPRT1、TBP1、YWHAZ基因的SD值均<1,可用作本研究条件下的内参基因,而另外6个基因SD值则>1,不符合作为内参基因的标准。综合3种分析的结果,在本研究条件下,TBP1基因的稳定性最高,ACTB、GAPDH、SDHA、HPRT1和YWHAZ基因也符合作为内参基因的标准,都可研究在不同环境温度下民猪外周血单核细胞中基因表达时作为内参基因。     

血单核细胞计数增高影响因素分析

目的 通过分析体检人员血单核细胞增高的影响因素,为检后咨询和健康指导提供科学依据。方法 应用我院体检中心的数据平台,搜索2015年12月-2016年3月在我院体检的成年人（年龄18-65岁）体检资料,将体检资料相对完善的人员纳入分析,有2891人符合标准,女性1468人（占50.78%）,男性1423人（占49.22%）。体检人员中单核细胞计数增高的有400人,其中女性175人（占43.75%）,男性225人（占56.25%）。将单核细胞计数增高的人员按体质量、血脂、血尿酸异常进行统计学分析。结果 单核细胞计数增高伴体质量增加与单核细胞计数增高而体质量正常比较,χ²=14.28（P<0.01）,单核细胞计数增高伴血脂高与单核细胞计数增高而血脂正常比较,χ²=83.25（P<0.01）,单核细胞计数增高伴血尿酸高与血尿酸正常比较,χ²=3.94（P<0.05）。结论 体检人员中单核细胞计数增高与受检者体质量增加、血脂增高、血尿酸增高有相关性。血常规检查和身高体质量检查是体检人员必查项目,在出现体质量增加伴单核细胞计数增多时可提示受检者结合自身情况做进一步相关检查,并采取积极干预措施以利身体保持良好的健康状态。     

基因分型技术在单核细胞增生性李斯特菌监测溯源上的应用

单核细胞增生性李斯特菌Listeria monocytogenes是一种重要的食源性人畜共患病原菌,能引起人和多种动物流产、脑膜炎、肠胃炎、败血症、死胎等病症。与传统基于表型的分型方法相比,基因分型方法具有简单快速、分辨率高、敏感性强、重复性好等特点,在李斯特菌病病原菌的监测和溯源中具有重要的应用价值。对单核细胞增生性李斯特菌的3类基因分型方法:酶切技术,DNA测序技术和聚合酶链式反应（PCR）扩增技术进行了概述,从分型成本、样本通量、分辨力、灵敏度、重复性、快捷性和普及性等方面比较了3类基因分型方法的主要特点,重点评述了这些方法在单核细胞增生性李斯特菌暴发监测和溯源上的应用案例,为研究不同基因分型方法在单核细胞增生性李斯特菌暴发诊断、分型检测及感染溯源等方面的应用提供参考。     

仔猪李氏杆菌病的诊断与治疗

<正>猪李氏杆菌病(Swine listeriosis)主要是由产单核细胞李氏杆菌引起的人、家畜和禽类的共患传染病。猪发病后,主要表现为脑膜炎、败血症和流产的特征。哺乳仔猪发病多为脑膜炎型。随着养猪业的发展,该病在我国较多省份发生,并呈现出散发状态,发病率逐年有上升趋势。2010年11月份,我区     

单核细胞增生李斯特菌快速检测技术的建立及应用

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可通过食物链感染人类,严重危害人体健康。因此快速检测食物样品中Lm对于李斯特菌病的防控尤为必要。细胞壁表面蛋白ActA是Lm重要的毒力因子,在前期制备的ActA单克隆抗体的基础上,将其与磁珠进行偶联,并结合李斯特菌显色培养基快速检测Lm。结果表明：抗体最适偶联量为100μg,最佳偶联时间为4 h,细菌最佳富集时间为15 min。在此基础上建立了免疫磁珠快速检测技术,具有特异性强、灵敏度高等优点。综上,该技术可高效检测出食品中的Lm,对预防和控制李斯特菌病的发生具有重要意义。     

奶牛源单核细胞增生性李斯特菌分离鉴定及流行调查

为了解本地区规模化奶牛场单核细胞增生性李斯特菌的流行情况，本研究采集了320份奶牛鼻拭子，进行单核细胞增生性李斯特菌的分离、培养和PCR鉴定。鉴定结果表明分离出6株单核细胞增生性李斯特菌，分离率1.88%，本研究为本地区奶牛单核细胞增生性李斯特菌的防控及保障动物性食品安全奠定了技术基础。