旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2对宿主免疫功能的影响

[目的]本文旨在分析旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2(GLIPR1L2)对宿主免疫功能的影响。[方法]用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆旋毛虫GLIPR1L2基因，构建表达载体，获得重组蛋白(rGLIPR1L2),用Western blot分析rGLIPR1L2的反应原性。将大鼠外周血单核细胞(PBMC)与rGLIPR1L2共孵育，用免疫荧光检测技术(IFA)检测rGLIPR1L2与大鼠PBMC的结合，分析rGLIPR1L2对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。大鼠腹腔注射rGLIPR1L2后，测定血清中IL-4、IL-9、IL-17、TGF-β、IFN-γ等细胞因子的变化。背部皮下多点注射对小鼠进行免疫后，ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体的变化，收集旋毛虫成虫和肌肉幼虫并计数，分析rGLIPR1L2的免疫保护作用。[结果]体外试验表明，rGLIPR1L2能够促进大鼠PBMC的增殖与迁移，增强细胞NO分泌和吞噬功能，一定浓度下可提高细胞凋亡比例。体内试验显示rGLIPR1L2能促进大鼠IL-4分泌，但对细胞因子IFN-γ、IL-9、IL-17和...     

LIPI-4 EII对单核细胞增生性李斯特菌关键毒力因子转录调控的影响

为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用，本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_help)和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_native)，测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况；RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平。结果显示:1)EII基因缺失株LM928ΔEII构建成功，重组回补质粒pIMK2-EII和pIMK2-EII-P_native及回补株CLM928ΔEII-P_help和CLM928ΔEII-P_native构建成功。2)在体外培养下，EII对LM的生长曲线没有影响。但在侵染HCMEC/D3后，LM928ΔEII在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P<0.05)，2和4 h的胞内细菌量极显著高于LM928(P<0.01)，CLM928ΔEII-P_native在2、4和6 h恢复至野生株水平(P>0.05)，而CLM928ΔEII-P_help在2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P<0.01)。3)体外培养条件下，相比于野生株，LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01)；CLM928ΔEII-P_help中66.7%(6/9)的基因转录水平上升1~4倍，CLM928ΔEII-P_native中88.9%(8/9)的基因转录水平倍数变化在1倍以内。在HCMEC/D3细胞内，相比于野生株，LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01)；CLM928ΔEII-P_help中33.3%(3/9)的基因转录水平上调1~3倍，CLM928ΔEII-P_native中基因转录水平倍数变化在1倍以内。综上，LIPI-4 EII对LM关键毒力因子的转录具有负调控作用。本研究为系统探究LIPI-4参与LM致病性机制奠定基础。     

单核细胞增生李斯特菌qPCR检测方法的建立及应用

【目的】为了建立一种快速、准确、可靠的畜产品中单核细胞增生李斯特菌荧光定量PCR检测方法。【方法】根据保守序列设计并筛选出一对特异性引物，经过反应体系及程序优化，建立染料法qPCR检测方法，并使用临床样品评价该检测方法的效果。【结果】建立的qPCR方法特异性较好，扩增，对纯培养细菌的检测限可达到10² CFU/mL,检测方法变异系数小，稳定性高；对生猪肉和牛奶人工污染模型中的检测限为10³ CFU/mL,比普通PCR灵敏度高10倍。使用qPCR分别对50份牛奶样品和生猪肉样品检测，阳性率均为2.00%,与普通PCR方法验证结果一致。【结论】成功建立一种特异性强、敏感性高、稳定性良好的绝对定量检测单核细胞增生李斯特菌的荧光定量PCR方法，可以用于临床样品单核细胞增生李斯特菌的检测。