基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体

基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。     

不同化学激活方法及卵丘细胞层数对牛体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

为探索适宜的牛体外成熟卵母细胞孤雌激活方式,提高核移植效率及研究胚胎孤雌发育。研究比较了不同浓度的乙醇( EH)、离子霉素(ionomycin)、钙离子载体A23187与蛋白激酶抑制剂6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)、细胞松驰素(cytochalasin B, CCB)对牛卵母细胞激活发育的影响,并在相同条件下,比较了不同卵丘细胞层数对卵母细胞激活后胚胎发育能力的影响。结果表明: (1) 5 μmol·L-1 Ionomycin,10 μmol·L-1 A23187,7% EH分别联合2 mmol·L-1 6-DMAP,CCB均可以有效地激活牛孤雌胚,其中以Ionomycin＋6-DMAP+CCB组囊胚发育率极显著高于其他各组(P<0.01),并且激活液中CCB的存在对牛孤雌胚胎的发育有利;(2) 卵母细胞包被的卵丘细胞层数不同对卵母细胞成熟激活有显著的影响,卵丘细胞层数3～5层和多于6层的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)孤雌激活的分裂率和囊胚率分别为69.09%,31.58%和75.14%,38.85%,这2组之间差异不显著(P>0.05), 但其显著高于1～2层组与混合组(P< 0.05), 因此,这2组细胞是最佳的试验研究材料。     

一株铰链孢属真菌培养条件及激活蛋白的提取

本研究以PD培养液为测定培养基,对一株铰链孢属(Alternaria spp.)真菌的培养条件进行了初步研究,通过正交试验设计,确定其最佳培养条件为26℃,160 r/min,装液量120 mL/250 mL,培养72 h时菌丝干重量最高。使用超声波破碎法,从所培养的铰链孢属真菌中提取到分子量为42～43kD的激活蛋白。     

不同因素对包膜尿素材料有机物分解的影响

在不同温度、水分等条件下,将有机物料进行发酵培养,培养7 d后检测其水溶性有机质/氮含量。结果表明:微生物G对物料中有机氮的分解比微生物H的分解能力强,微生物H对物料中有机质的分解比微生物G的分解能力强。当激活剂添加量为0.33%、水分含量为80%、温度为30℃时,微生物G的活性最高,物料J在微生物G的作用下,其水溶性有机质和水溶性有机氮含量均达到最大值,发酵效果最好。     

W-HE生物表面活化剂对玉米产量及产量性状的影响

为了明确W-HE生物表面活化剂的使用效果,经过3a试验,调查其对玉米产量及植株素质的影响。结果表明:使用W-HE生物表面活化剂能促进玉米前期的生长发育,促进根系的生长和干物质的积累,植株生长加快,果穗变大,百粒重提高,双穗率提高,增产幅度达10%以上。     

MST种子活力剂对水稻种子活力及幼苗生长的影响

为提高水稻秧苗质量和指导水稻生产提供技术支撑,以阳光香稻和新丰20水稻种子为材料,研究不同浓度MST种子活力剂(稀释0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、300倍)对水稻种子活力和幼苗生长的影响。结果表明:各处理均能提高水稻种子发芽指数、活力指数、幼苗干重、根系鲜重、根系干重、苗高、根系长度等各项指标。稀释40~45倍的MST种子活力剂拌种可显著提高种子活力,促进幼苗生长;稀释倍数升高至100倍以上时,2个水稻品种的种子活力及幼苗生长各项指标有所下降;MST在水稻种子处理的适宜浓度为稀释40~45倍。     

Emerging therapeutic approaches for canine sarcomas: Pushing the boundaries beyond the conventional

Sarcomas represent a group of genomically chaotic, highly heterogenous tumours of mesenchymal origin with variable mutational load. Conventional therapy with surgery and radiation therapy is effective for managing small, low‐grade sarcomas and remains the standard therapeutic approach. For advanced, high‐grade, recurrent, or metastatic sarcomas, systemic chemotherapy provides minimal benefit, therefore, there is a drive to develop novel approaches. The discovery of “Coley's toxins” in the 19th century, and their use to stimulate the immune system supported the application of unconventional therapies for the treatment of sarcomas. While promising, this initial work was abandoned and treatment paradigm and disease course of sarcomas was largely unchanged for several decades. Exciting new therapies are currently changing treatment algorithms for advanced carcinomas and melanomas, and similar approaches are being applied to advance the field of sarcoma research. Recent discoveries in subtype‐specific cancer biology and the identification of distinct molecular targets have led to the development of promising targeted strategies with remarkable potential to change the landscape of sarcoma therapy in dogs. The purpose of this review article is to describe the current standard of care and limitations as well as emerging approaches for sarcoma therapy that span many of the most active paradigms in oncologic research, including immunotherapies, checkpoint inhibitors, and drugs capable of cellular metabolic reprogramming.     

PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA

钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白, 可以促进钙激活酶活性的发挥, 从而促进肉的嫩化。采用PCR技术, 以山羊肝脏cDNA为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(calpainactivator) 基因, 并进行了序列测定。该片段长1 017bp, 5′—端非翻译区长39bp, 3′—端非翻译区长567bp。编码区长411bp, 编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质, 其理论分子量为14 298Da。与EdonMelloni等(1998) 报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现, 二者仅有五个位点不同。