过表达MyBPC1对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

旨在探究肌球蛋白结合蛋白C1（myosin binding protein C1,MyBPC1）对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响,为进一步研究MyBPC1在细胞分化和肌肉发育过程中的调控作用提供依据。本研究利用西门塔尔胎牛原代牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型模拟牛骨骼肌的生长发育过程。采用qRT-PCR和Western blot检测MyBPC1的细胞时序表达谱。试验分为两组。在RNA水平每组4个重复,每个重复20 μL;在蛋白水平每组3个重复,每个重复15 μg。采用qRT-PCR和Western blot检测牛骨骼肌卫星细胞转染MyBPC1的过表达效果,并进一步检测细胞增殖期标志因子Pax7、Ki67以及细胞分化期标志因子MyHC、MyOG的表达变化情况,观察牛骨骼肌卫星细胞肌管形成状态。结果,MyBPC1在牛骨骼肌卫星细胞分化前后表达水平存在极显著差异,牛骨骼肌卫星细胞诱导分化后MyBPC1的mRNA和蛋白表达量均极显著高于增殖期（P<0.01）。过表达MyBPC1后,细胞分化形成的肌管数量明显多于对照组,增殖标志因子Pax7的mRNA水平和蛋白表达水平无显著差异,分化标志因子MyHC的mRNA水平和蛋白表达水平极显著高于对照组（P<0.01）。过表达MyBPC1可以促进牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化,为进一步开展MyBPC1对牛骨骼肌卫星细胞的调控机制奠定基础。     

MSTN基因对牛肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响

为探究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究前期利用定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析野生型蒙古牛（MG.WT）和MSTN^+/-蒙古牛（MG.MSTN^+/-）腿臀肌肌肉组织中蛋白质水平和磷酸化修饰水平的差异变化,使用已建立的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型,检测设计合成的MSTN siRNA （si-MSTN）干扰效果;采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测转染si-MSTN的增殖期（GM）和分化第3天（DM3）牛骨骼肌卫星细胞中肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的mRNA和蛋白水平的表达变化,研究敲低MSTN表达对肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响。结果显示,在MSTN^+/-蒙古牛肌肉组织中共鉴定到16个肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因表达丰度上调;转染si-MSTN细胞中的MSTN表达水平极显著降低（P<0.01）;在转染si-MSTN的GM期牛骨骼肌卫星细胞中,肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因ENAH、ACTN4和Cdc42的mRNA水平均显著升高（P<0.05）,PFN1、RhoA和ACTN4的蛋白水平均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;在转染si-MSTN的DM3牛骨骼肌卫星细胞中,ENAH、CFL1、SCIN和Cdc42基因mRNA水平均显著升高（P<0.05）,RhoA基因mRNA水平极显著升高（P<0.01）,PFN1和ACTN4的蛋白水平均显著升高（P<0.05）。结果表明,干扰MSTN可以促进肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的表达,探明了MSTN可能通过介导肌动蛋白细胞骨架调节通路影响牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的分子机制,为进一步研究MSTN对牛成肌分化的调控机制提供参考。     

Effect of Vitamin E on Bovine Granulosa Cells Apoptosis and Proliferation through Cx43

The aim of this study was to determine the effect of vitamin E on Cx43,the mechanism and function of vitamin E on bovine granulosa cells apoptosis and proliferation.In this study,granulosa cells were isolated from bovine ovary and cultivated in vitro by adding different concentration of vitamin E (0,25,50,100,200 and 500 μmol/L) for 24 h.After cultured,apoptotic cells were detected by FCM,mRNA expression levels of BCL2/BAX、P53 and Cx43 genes were determined by Real-time PCR and cell proliferation was detected by CCK8.The results showed that compared to control group,100 μmol/L vitamin E could significantly inhibit the apoptosis of granulosa cells (P<0.05).Real-time PCR detection results showed that vitamin E significantly changed the mRNA expression levels of BCL2/BAX,P53,Cx43 genes (P<0.05).Vitamin E could significantly improve granulosa cells proliferation when granulosa cells were treated for 24 and 36 h (P<0.05).The results provided a theoretical basis on further analysis for studing the influence mechanism of vitamin E on oocytes development and maturity,and improvement of female animal reproduction by influencing granulosa cells proliferation and apoptosis.     

影响‘小凤兰’根状茎增殖、分化和壮苗的因素研究

以‘小凤兰’根状茎为试材,研究了影响‘小凤兰’根状茎增殖、分化、生根壮苗的因素。结果表明:MS基本培养基、蔗糖30g/L、6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L、活性炭0.5g/L有利于根状茎增殖,而添加20%椰汁和番茄汁40g/L会抑制根状茎增殖。1/2MS基本培养基、蔗糖30g/L、6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L、20%椰汁、1 000lx光照强度有利于根状茎分化,不加活性炭有利于芽分化,但抑制根分化,而添加活性炭则抑制芽分化,促进苗分化。添加土豆泥60g/L显著促进试管苗生长,3~4cm高的苗在培养基1/2MS+6-BA 0.1mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+土豆泥60g/L+卡拉粉8g/L+活性炭0.5g/L中培养40d即可移栽。     

欧李优系试管苗增殖关键技术研究

以欧李优系试管苗为试材,采用单因素试验设计,研究了不同生长调节物质组合、基本培养基类型、附加物和蔗糖浓度对试管苗生长状态和增殖效率的影响。结果表明:在MS+6-BA 0.5mg·L~(-1)+KT 0.5mg·L~(-1)+IBA 0.05mg·L~(-1)培养基上,附加水解乳蛋白(LH)300mg·L~(-1)、蔗糖35g·L~(-1)、琼脂5.8g·L~(-1),为欧李优系试管苗增殖的最佳培养条件。     

条件性敲除D1133L基因的重组非洲猪瘟病毒的构建及增殖特性

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞(BMDMs),以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在的条件下,经绿色荧光和PCR鉴定,获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制差异,利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异,分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示：本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株;在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中,vD1133Li复制能力恢复。综上所述,D1133L基因对于ASFV复制至关重...     

散叶烤房系列研究 2.装炕技术研究

为解决散叶烤房烟叶堆放问题，采用插板式装烟法和自然堆积法研究了散叶烤房的装炕技术，结果表明：散叶烤房装烟时以自然堆积法，稍稍用力推挤，单层密度保持在75~85kg/m3为宜，并提出了相应的采收和装炕技术要点，即下部叶适时早收，中部叶尚熟至适熟采收，上部叶充分成熟采收。装炕时烟束要叠放整齐，叶片背面靠向界墙方向，正面面向装烟者，保持叶片与装烟板水平面夹角70~80°，一层靠一层。     

不同激素对碧云茶树丛生芽增殖培养的影响实验

为了获得碧云茶树的组培技术,加快其优良品种繁殖速度,2010～2011年进行了不同浓度的细胞分裂素6-BA和生长素NAA对碧云茶树丛生芽增殖培养的影响。结果表明,以MS为基本培养基,当6-BA为2.0 mg/L,NAA为0.2 mg/L时,对碧云茶树芽的诱导和增殖最有利,增殖率可达2.84;其中NAA差异不显著,6-BA差异显著。     

信息广场

<正>河北省上半年渔业资源增殖放流工作成绩显著在省渔业资源增殖放流指挥部的周密安排部署和精心指导下,自今年4月初开始,河北省渔业资源增殖放流活动正式拉开序幕。全省各级渔业主管部门、渔政执法机构、省水产品质量检验检测站以及育苗生产单位高度重视,通力协作,上半年渔业资源增殖放流工作取得显著成绩。截止到6月底,共完成放流海淡水苗种48亿尾(粒),放流水域涉及秦皇岛、唐山、沧州、保定、廊坊等个设区     

TDZ对杏香兔耳风组培苗复壮的影响

为了了解TDZ对组培苗增殖的影响情况,探讨了TDZ在衰退组培苗复壮过程中的作用,以增殖衰退的杏香兔耳风组培苗为试验材料,就TDZ的不同添加方式(抽滤灭菌和高压灭菌)和不同浓度(0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L)处理对组培苗增殖系数、有效芽及苗高生长的影响情况进行了试验。结果表明:当TDZ的浓度0.2 mg/L时,TDZ的添加方式对组培苗的增殖系数和有效芽数均有较大影响,抽滤灭菌后的增殖系数和有效芽数要明显高于高压灭菌的;不同浓度的TDZ对有效芽数和髙生长的影响均有极显著的差异性(P0.01),当TDZ浓度为0.8 mg/L时,苗质量总体达到最优,增殖系数为5.11,达到了预期的复壮效果;最优生根培养基配方为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+IBA 0.1 mg/L。在杏香兔耳风组培苗复壮过程中,TDZ可作为一种有效的植物生长调节剂使用。