预防性给予生物活性肽对巨噬细胞抵御LPS刺激的调节作用

预防性给予巨噬细胞(RAW264.7细胞)不同浓度的生物活性肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)后,用脂多糖(LPS)刺激细胞,通过检测细胞因子表达和炎性蛋白基因转录,观察生物活性肽QEPV对细胞抵御LPS刺激的调节作用。结果表明,0.1g/L的QEPV有显著的促进细胞增殖作用,0.5g/L浓度以下的QEPV对RAW264.7细胞无增殖抑制作用。0.5g/L QEPV预处理RAW264.7细胞后,用LPS刺激细胞,其IL-6、IL-12等促炎细胞因子的分泌降低,抗炎细胞因子IL-10分泌提前,分泌量增加,COX-2、iNOS基因的转录水平降低,说明乳源性生物活性肽QEPV对RAW264.7细胞抵御LPS刺激起正向调节作用。     

蟾酥醇提取物的体外抗炎作用研究

为了考察蟾酥醇提取物的体外抗炎作用,用LPS诱导RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,采用Griess法测定蟾酥醇提取物对细胞上清液中的NO水平,ELISA法测定TNF-α、ILlβ、IL-6含量,荧光法测定细胞内ROS水平。结果显示,蟾酥醇提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞所分泌的炎症因子(NO、TNF-α、IL-1β、IL-6)有明显的抑制作用,与空白对照组相比明显降低,同时蟾酥醇提取物极显著降低LPS诱导的细胞内ROS水平(P0.01)。由此推测,蟾酥醇提取物通过抑制炎症因子、降低细胞内活性氧水平减轻细胞的炎症反应,具有良好的抗炎作用。     

猪圆环病毒2型体外诱导RAW264.7细胞氧化应激模型的建立

[目的]探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染量、感染时间与被感染RAW264.7细胞活性氧水平动态变化的相关性,为建立RAW264.7细胞氧化胁迫体外模型提供参考依据.[方法]PCV2原液调至5×106/mL,经10、102、103和104倍稀释(10-1、10-2、10-3和10-4释度)后,感染作用RAW264.7细胞2h,弃病毒液,加入含5% FBS的DMEM培养液继续培养,分别于第4、8、12、24和48 h收集细胞上清液或细胞,测定一氧化氮(NO)、活性氧自由基(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)等指标.[结果]10-1PCV2感染RAW264.7细胞后能有效升高细胞NO、ROS水平,降低细胞GSH水平和GSH/GSSG,升高细胞XOD、MPO和iNOS活性,表明以10-1pcv2感染RAW264.7细胞一定程度上能改变细胞氧化还原状态,诱导细胞产生氧化应激.[结论]PCV2感染能诱导RAW264.7细胞发生氧化应激,并确立10-1 PCV2(5× 105/mL)体外感染RAW264.7细胞4~24 h是建立RAW264.7细胞氧化胁迫模型的最佳条件.     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10 μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松（DEX）诱导的RAW264.7细胞系凋亡（P < 0.01）。1 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用（P < 0.05）;10 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有显著的促进作用（P < 0.05）。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有极显著的促进作用（P < 0.01）,但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。     

两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征及分析

通过对绿色荧光蛋白（GFP）布鲁氏菌弱菌株M5（GFP-M5）和S19（GFP-S19）侵染小鼠巨噬细胞（RAW264.7）及对其与胞内溶酶体、内质网、高尔基体初次结合所用时间进行测定,探讨分析两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征。将GFP-M5和GFP-S19分不同时间段分别侵染RAW264.7,利用激光共聚焦和流式细胞仪观察和检测。结果显示,GFP-M5和GFP-S19均构建成功。布鲁氏菌M5和S19及GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.7后胞内生存能力无明显差异。GFP-M5和GFP-S19侵染30 min后均已进入小鼠巨噬细胞,2 h分别到达溶酶体、内质网和高尔基体。而两种弱毒株在1、2、3、4 h与各细胞器结合率相近。流式细胞仪检测结果显示,GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.7的GFP⁺细胞含量无显著差异（P>0.05）。结果提示,两种弱毒株在侵染进入宿主细胞的初期及侵袭能力并没有明显差异。     

In Vitro and In Vivo Anti-Inflammatory Effects of Sulfated Polysaccharides Isolated from the Edible Brown Seaweed,Sargassum fulvellum

In the present study, the in vitro and in vivo anti-inflammatory effects of the sulfated polysaccharides isolated from Sargassum fulvellum (SFPS) were evaluated in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 macrophages and zebrafish. The results indicated that SFPS improved the viability of LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages from 80.02 to 86.80, 90.09, and 94.62% at the concentration of 25, 50, and 100 µg/mL, respectively. Also, SFPS remarkably and concentration-dependently decreased the production levels of inflammatory molecules including nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-alpha, prostaglandin E₂, interleukin-1 beta, and interleukin-6 in LPS-treated RAW 264.7 macrophages. In addition, SFPS significantly inhibited the expression levels of cyclooxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase in LPS-treated RAW 264.7 macrophages. Furthermore, the in vivo test results indicated that SFPS improved the survival rate of LPS-treated zebrafish from 53.33 to 56.67, 60.00, and 70.00% at the concentration of 25, 50, and 100 µg/mL, respectively. In addition, SFPS effectively reduced cell death, reactive oxygen species, and NO levels in LPS-stimulated zebrafish. Taken together, these results suggested that SFPS possesses strong in vitro and in vivo anti-inflammatory activities, and could be used as an ingredient to develop anti-inflammatory agents in the functional food and pharmaceutical industries.     

Inhibitory Effect of N,N-Didesmethylgrossularine-1 on Inflammatory Cytokine Production in Lipopolysaccharide-Stimulated RAW 264.7 Cells

N,N-Didesmethylgrossularine-1 (DDMG-1), a compound with a rare α-carboline structure, was isolated from an Indonesian ascidian Polycarpa aurata as responsible for the observed inhibitory activity against TNF-α production in lipopolysaccharide-stimulated murine macrophage-like RAW264.7 cells. DDMG-1 inhibited the mRNA level of mTNF-α, IκB-α degradation, and binding of NF-κB to the target DNA site in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Moreover, DDMG-1 had an inhibitory effect on the production of IL-8, which is produced in CD14⁺-THP-1 cells stimulated by LPS. DDMG-1 is thus a promising drug candidate lead compound for the treatment of chronic inflammatory diseases, such as rheumatoid arthritis.     

干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对巨噬细胞活性的影响

探讨干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对小鼠巨噬细胞功能的影响。以培养液单纯培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为对照,研究干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖对RAW264.7细胞代谢水平、吞噬中性红能力及释放NO的影响。不同浓度磷壁酸和肽聚糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞代谢MTT能力、吞噬中性红能力有明显增强作用,并呈一定的剂量效应,在相同质量浓度时,两种细胞壁组分激活巨噬细胞能力无显著差异。同时诱导产生NO量也随着浓度增大而增加,当浓度达到50μg/mL时,磷壁酸诱导能力显现出较高的水平。干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖能激活小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,提高其代谢水平及吞噬能力,同时可诱导具有杀瘤作用的活性因子,并具有一定的剂量效应。     

人参多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞的免疫调控作用

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激条件下人参多糖(GPS)对小鼠单核巨噬细胞形态及免疫功能的调节作用。采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7),通过测量不同浓度(1、0.5、0.1 mg/mL)GPS对细胞形态、生物酶活性、促炎症因子分泌及TLR4/NF-κB信号通路mRNA表达量的影响来研究不同浓度的GPS对LPS引起小鼠巨噬细胞免疫应激的调控作用。结果表明:添加GPS能抑制由LPS引起的细胞形态和细胞增殖能力的变化;1 mg/mL GPS能够显著提高巨噬细胞酸性磷酸酶的活性;0.5、1 mg/mL GPS能够显著缓解由LPS刺激引起的碱性磷酸酶活性的降低;不同浓度GPS均能显著降低由LPS诱导的促炎症因子IL-1β、TNF-α水平;LPS刺激显著提高巨噬细胞TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量,而添加GPS后,巨噬细胞TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量均表现出不同程度降低(P<0.05)。结果显示,添加GPS可以改善细胞形态,恢复细胞增殖能力,GPS可通过调节TLR4/NF-κB信号通路降低促炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌及表达,减少机体免疫应激反应。     

蒲公英根多糖的体外抗炎作用研究

从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL～200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。