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利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料,对提取双链RNA (dsRNA)的2种方法和提取总RNA的3种方法进行了分析比较,并对总RNA的提取方法进行了改进,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA,在此基础上进行了反转录(RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒(ASPV)的RT-PCR检测,建立了ASPV有效RT-PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约316 bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT-PCR检测,且dsRNA优于总RNA。 相似文献
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梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测 总被引:6,自引:2,他引:6
为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术, 用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料, 利用D IG标记, 研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响, 退火温度、Taq DNA聚合酶、Mg2+ 、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明: RNasin的用量大于0.2 U·μL-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强; 只有当dNTPs浓度达1.0 mmol·L-1时才能生成一定量的cDNA;AMV浓度在0.3~0.5 U·μL-1均可进行正常的逆转录, 而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多; 引物浓度达到0.9μmol·L-1以上时才能进行有效的逆转录, 并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20~30次可出现较强的蓝色信号, 引物浓度在0.8~1.2μmol·L-1时显色较好; Taq酶浓度为20 U·mL-1以上, 均显示较深的蓝色; Mg2 +浓度为1.5mmol·L-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系, 利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证, 取得了很好效果。 相似文献
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以马铃薯品种费乌瑞它(Favorita)为试材,采用营养液无土栽培法,设5个外源钙浓度水平(25,75,150,300和500 mg/L),研究外源钙浓度对马铃薯单株块茎平均重量、数量和块茎内钙浓度的影响。结果表明,随外源钙浓度的升高,马铃薯单株块茎的数量减少。单株块茎的平均重量,以钙水平150,300和500 mg/L增幅较大,显著高于钙水平为25和75 mg/L的处理。单株产量以钙水平25、75、150和300 mg/L的处理显著高于钙水平500 mg/L处理。然而随外源钙浓度的升高,马铃薯商品率明显提高,块茎内钙浓度也相应升高,但块茎内钙浓度与块茎数量呈负相关关系。 相似文献
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影响库尔勒香梨果实脱萼宿萼因素研究 总被引:1,自引:0,他引:1
库尔勒香梨果实大小适中,萼片大部脱落,香味浓郁,皮薄肉脆,清甜爽口,细嫩多汁,维生素C含量丰富且耐贮藏,尤以芳香味最为独特。随着香梨大面积栽培,产量大幅度提高,果实品质有所下降,不脱萼果增多,出现外观不美(果皮粗)、果个小、果心大、萼部突出(突顶)等缺点,尤其是突萼果,严重影响了香梨的销售。 相似文献