褐色双孢蘑菇原生质体制备、再生条件的研究

为了提高褐色双孢蘑菇原生质体产量和再生率,本研究以褐色双孢蘑菇棕秀一号为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对褐色双孢蘑菇制备原生质体的条件进行优化。结果表明,原生质体最佳制备条件为溶壁酶1.35%、蜗牛酶7.01%、酶解温度30.4℃、褐色双孢蘑菇菌丝体菌龄8.36 d、酶解时间3.00 h,在此条件下原生质体产量高达4.39×10~7个·mL^-1;当溶壁酶含量为1.32%、蜗牛酶含量为6.96%、褐色双孢蘑菇菌丝体菌龄9.00 d、酶解时间2.97 h、酶解温度31.0℃时,原生质体的再生率最高(15.1%)。利用紫外诱变和化学诱变技术对褐色双孢蘑菇原生质体进行生长特性诱变,筛选获得了18株生长速率提高的突变菌株。本研究为褐色双孢蘑菇在遗传转化、基因组重排、基因编辑技术等后续分子遗传学研究提供了理论基础。     

浅析玉米分蘖对玉米生产的影响及相应管理办法

正玉米分蘖的形成因素是多方面的,有内因也有外因,形成的原因不同对玉米生产的影响也不一样,相应的管理措施也各异。1玉米形成分蘖的因素1.1生理因素在玉米的生长期内,玉米每个节的叶腋处都会形成一个腋芽,一般情况下,除植株顶部5~8节叶腋处的叶芽不发育以外,其余腋芽均可发育。最上部的腋芽发育成果穗,靠近基部的腋芽则形成分蘖。若玉米的顶端优势受到了抑制,玉米基部的腋芽才能形成分蘖。1.2品种差异玉米产生分蘖是由玉米品种的特性决定     

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数10%,批间变异系数20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。     

一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤DNA提取方法

建立了一种有效提取根际土壤微生物基因组DNA提取方法,提取的基因组DNA能够有效进行根际土壤微生物分子生态学相关的分子操作。该方法提取了12份不同作物根系土样的基因组DNA,每克土样都能够获得10μg以上的基因组DNA,片段大小在20kb左右。A260/A230平均值为1.505,A260/A280平均值为1.780,全波长吸收曲线与纯核酸一致。PCR扩增,均能得到清晰的单一目标条带。不同稀释浓度的基因组DNA污染物都能进行限制性酶切操作。稀释100倍土样DNALambda DNA酶切效果和在ddH2O中酶切效果一致。     

超声辅助酶解茶渣蛋白制备抗氧化活性肽

利用食源蛋白制备具有抗氧化能力的天然活性肽是当前的研究热点。为了优化超声辅助酶解茶渣蛋白制备抗氧化活性肽工艺,本研究以茶渣为原料,以酶解液DPPH清除率为指标,在单因素逐级优化基础上,选定酶解pH值、温度、时间、加酶量进行4因素3水平正交试验设计和分析。结果表明,碱性蛋白酶较好,在p H值为7.5、温度50℃、时间20 min、加酶量为400 U/g、超声功率为105 W的优化条件下酶解,酶解液对DPPH清除率达为85.36%,比对照活性提高了为31.87%。可见,在本试验条件下低功率超声能有效提高碱性蛋白酶酶解茶渣蛋白效率,增加抗氧化活性肽得率,为开辟茶渣高值化利用的新途径提供实验依据。     

土壤真菌群落和潜在功能对施加外源Bt毒素的响应

【目的】转Bt基因植物和Bt菌生物农药释放的Bt毒素是一类具有生物毒性的潜在环境外源污染物，Bt毒素环境行为和生态效应是转基因植物和植物用转基因微生物安全风险评价的重要内容，但是外源Bt毒素对土壤真菌群落和潜在功能的影响还不清楚。【结果】本研究发现，Bt毒素施加量和培养时间均可以显著影响土壤真菌群落组成，且随着Bt毒素施加量增加和土壤培养时间延长，土壤真菌群落差异性逐渐变大。施加Bt毒素提高了土壤真菌群落香农指数和关联网络的负相关性比例及模块数，因而没有对土壤真菌群落的多样性和稳定性产生负面影响。【结论】上述结果表明，评估Bt毒素的环境行为及微生态效应要关注Bt毒素施加量及其长期影响。随着Bt毒素施加量增加，Phymatotrichopsis、Homalogastra、Geosmithia和Apiotrichum等真菌以及参与蛋白质降解、碳素代谢和磷素代谢的功能基因编码酶相对丰度显著升高，推测上述真菌物种和潜在功能参与了Bt毒素在土壤中的降解和转化过程。研究结果为转Bt基因植物、Bt重组菌生物农药以及Bt毒素的生态安全风险评价提供了科学参考和理论依据。     

基于RPA技术对转CP4-EPSPS基因产品的快速检测

核酸检测在农产品安全检测中的应用十分广泛，随着转基因作物的商业化种植，迫切需要一种快速、特异、灵敏的转基因作物检测方法。利用重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification，RPA）技术对含有转基因产品及其制品中CP4-EPSPS基因进行检测，共设计5对引物来筛取最佳引物，并对反应体系和反应温度进行优化。结果表明，该方法采用20 μL体系在37 ℃恒温反应15 min即可对CP4-EPSPS基因进行快速检测。该方法检测转基因的灵敏度阈值为45拷贝，灵敏度高、特异性强，为大规模筛查CP4-EPSPS基因提供了一种新的途径。     

常压室温等离子体诱变选育高固氮酶活褐球固氮菌

为增强固氮酶活性以提高现有固氮菌的固氮能力，采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma，ARTP)诱变技术处理褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）CICC21686，用乙炔还原法筛选具有高固氮酶活性的突变株28s-20，并观察该突变株酶活的遗传稳定性；通过梯度温度和pH培养，探究高酶活突变株的生物学活性；采用盆栽试验，探究突变株对玉米植株干重及全氮量的影响。结果表明，复筛获得突变株28s-20的固氮酶活较出发菌株提高了101.72%；经5次传代，证实该菌株具有良好的遗传稳定性；突变株最适生长温度为28 ℃，培养基初始pH为7.5；与野生株相比，突变株显著增加玉米干重及全氮量，分别提高21.16%和34.36%。诱变高酶活菌株为褐球固氮菌的菌种优化及农业生物固氮提供了技术支持。     

采用常压室温等离子体诱变技术选育高产多糖黑木耳菌株

为选育高产多糖的黑木耳（Auricularia auricula）菌株，以黑威单片作为出发菌株，采用常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma, ARTP）诱变原生质体，经过3轮迭代诱变，从菌丝生长速度较快的诱变菌株中筛选多糖产量较高的菌株，通过5代继代培养测定菌株的菌丝生长速度稳定性，采用拮抗实验观察菌株间的拮抗情况，通过简单重复序列区间（inter-simple sequence repeat, ISSR）分子标记分析菌株间的遗传差异。结果表明：与黑威单片相比，诱变菌株D3-56的菌丝生物量和多糖含量分别提高15.02%和48.40%，诱变菌株D3-60的菌丝生物量和多糖含量分别提高13.15%和60.83%，诱变菌株D3-56和D3-60的多糖产量分别提高70.69%和81.97%；诱变菌株D3-56和D3-60菌丝生长速度稳定，且与黑威单片存在遗传差异。