抗菌肽Shiva-1基因的人工合成与克隆

参照抗菌肽Ｓｈｉｖａ－１的氮基酸序列，兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子，设计了Ｓｈｉｖａ－１基因序列，加上适宜基因工程操作的酶切位点，人工合成了２条分别为９２ｂｐ和９１ｂｐ的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、ＥｃｏＲＩ酶切，将完整的Ｓｈｉｖａ－１基因反向克隆至ｐＵＣ１８载体，经ＰＣＲ检测和序列分析证明，已正确克隆了抗菌肽Ｓｈｉｖａ－１基因。     

牛BLG基因5′调控序列控制GFP基因在原代乳腺上皮细胞中的表达

采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养 ,并且构建了以牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因的真核表达载体。将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞 ,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导。结果表明 ,用 5 mg/ L 催乳素 5 mg/ L 胰岛素 1m g/ L 皮质醇诱导 ,在诱导 36 h后开始有荧光出现 ,诱导 4 8～ 6 0 h时荧光更强一些 ,而未经诱导的细胞 GFP则不表达     

水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素（mink growth hormone,mGH）的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8 mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOF-MS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600 μg/只,二免剂量为600 μg/只,三免剂量为400 μg/只。三免10 d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669 μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1：256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

非典型肺炎冠状病毒与其他动物冠状病毒的亲缘关系

非典型肺炎即重症急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndromes，SARS)，其病原目前被普遍认为是一种冠状病毒。本试验利用分子生物学计算机软件，首先对已在GenBank中发表的17株SARS病毒的主要结构蛋白基因S、M、N进行了定位，然后分别与已发表的其他冠状病毒的S、M、N基因进行同源性分析。结果发现，我国内地的5个SARS毒株的主要结构蛋白基因与其他冠状病毒的相对应基因的同源性普遍较低，而且变化范围较大。香港及国外的SARS毒株的情况恰好相反。从总体上看，SARS病毒与已发表的其他冠状病毒的亲源关系均较远，相对而言，与牛冠状病毒(BCV)、小鼠肝炎冠状病毒(MHV)的亲缘关系最近。这一结果对于SARS病毒的起源及流行病学研究乃至该病的预防和控制研究具有一定的参考价值。     

肉食兽细小病毒通用PCR诊断技术的建立

根据肉食兽细小病毒核苷酸序列高度同源的特点，设计合成了1对引物，以犬细小病毒、貂肠炎病毒和猫泛和白细胞减少症病细胞培养物为DNA模板，进行PCR特异性片段扩增，扩增片段大小为0．6kb。结果表明，扩增产物与设计的2个引物之间的序列大小一致。通过通用性、特异性与敏感性试验及对临床检样品检测，证明本法对肉食兽细小病毒通用。且具有快速、特异和高度敏感的特点。     

云岭黑山羊BMPR-IB基因部分编码区的克隆及多态性分析

应用RT-PCR方法从云岭黑山羊卵巢组织克隆与产羔性状相关的BMPR-IB基因。结果表明,克隆的BMPR-IB基因扩增片段长467 bp,扩增片段位于该基因编码区第497与963位碱基之间,与已报道的野生型山羊、绵羊、猪、人和鼠的BMPR-IB基因该编码区的同源性分别为99%、99%、92%、92%和87%;与野生型山羊相比,云岭黑山羊BMPR-IB基因第498位和575位碱基存在多态性位点,其中第498位碱基由T突变为C,组成的密码仍编码天冬氨酸（Asp,D）,为同义突变;第575位碱基由C突变为T,编码的氨基酸由脯氨酸（Pro,P）变为亮氨酸（Leu,L）,为错义突变;BMPR-IB蛋白的二级结构在错义突变位点可能具有多种构象。本研究结果为深入研究BMPR-IB基因与云岭黑山羊产羔性状间的关系奠定了基础。     

含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建

以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。     

动物生物化学教学现状及思考

动物生物化学是农业院校畜牧兽医专业学生必修的专业基础课.通过对全国部分农业高等院校的动物生物化学教学基本情况的调查研究,并结合工作经验,提出对本课程的教学改革的观点和看法.     

从国外引进的水貂发生冠状病毒性肠炎

1987年10～12月,我国北方沿海地区20多个貂场由加拿大、美国等地共引进了3万多只种貂。不久,即有10多个貂场引进的水貂出现肠炎流行。经我们初步调查,认为该病是貂冠状病毒性肠炎。该病初期呈散发,3～5天后病貂数急剧上升,7～10天内几乎全部水貂都发病,病程约1周。发病貂场一般在10～20天达流行高峰,30天左右逐