牛乳腺组织的冷冻保存及乳腺细胞的分离

为研究牛乳腺组织冷冻保存的可行性,将牛乳腺组织剪成直径小于0.5 mm的组织块,以含20% NBS和10% DMSO的DMEM/F12作为冷冻保护液,按如下程序进行冷冻保存:4 ℃平衡1 h,－20 ℃平衡2 h,－40 ℃平衡2 h,－80 ℃保存。1周后,复苏牛乳腺组织,检测组织的存活率,分离培养乳腺细胞,检测细胞的存活率,观察细胞生长状态。结果显示,复苏后的牛乳腺组织可重新贴壁生长,贴壁存活率为62.5%,经消化离散,可分离培养出乳腺细胞,细胞存活率为58.5%,培养24 h后细胞存活率为46.3%。随着培养时间延长,细胞活力恢复,第1代细胞存活率为93.2%,生长状态良好。该乳腺组织的冷冻方法操作简单、方便、快捷,且很好地保持了乳腺细胞的活力,为稳定和增加乳腺细胞的来源提供了很好的途径,为进一步研究乳腺的结构和发育提供了素材。     

牛LncRNA-133a对骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

【目的】 探讨长链非编码RNA LncRNA-133a对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化过程的影响。【方法】 利用测序样品3、6、9月龄胎牛及24月龄成年和牛骨骼肌肌肉组织,qRT-PCR法检测LncRNA-133a的组织时序表达谱。构建牛骨骼肌卫星细胞的体外成肌诱导分化模型,模拟牛骨骼肌的生长发育过程,qRT-PCR法检测LncRNA-133a和肌细胞分化标记因子MyoG、MHC的细胞时序表达谱。利用过表达LncRNA-133载体（pCDNA3.1-EGFP-LncRNA-133a） 或LncRNA-133a抑制物（si-LncRNA 133a） 转染牛骨骼肌卫星细胞,qRT-PCR法检测转染效率以及各转染处理组LncRNA-133a、MyoD、MyoG及MHC基因mRNA的表达水平,Western blotting检测MHC 基因的蛋白表达水平;同时,通过EdU细胞增殖检测、免疫荧光蛋白染色技术检测牛骨骼肌卫星细胞增殖阶段的细胞增殖量和分化阶段的肌管融合程度。【结果】 组织表达谱分析发现LncRNA-133a在3月龄胎牛肌肉组织中表达量最高,6月龄胎牛肌肉组织中次之,9月龄胎牛及成年牛肌肉组织中表达量最低,时序表达呈下降趋势;利用成功构建的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导分化模型,进行LncRNA-133a、MyoG、MHC的细胞时序表达谱分析,结果发现在牛骨骼肌卫星细胞分化过程中（D0-D3）,肌分化标记因子MyoG、MHC的表达水平逐渐升高,LncRNA-133a的表达在分化阶段呈上升趋势,且分化48 h时（D2）表达量最高;成功构建的过表达LncRNA-133a或抑制LncRNA-133a的牛骨骼肌卫星细胞模型,在增殖期（D0）：与对照组相比,过表达LncRNA-133a处理组EdU增殖染色检测得到EdU阳性细胞数显著增加（P<0.01）,而LncRNA-133a抑制处理组EdU阳性细胞数显著减少（P<0.01）;在分化48 h时（D2）：与对照组相比,LncRNA-133a过表达处理组肌细胞分化标记因子MyoD、MyoG及MHC的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Western blotting检测MHC蛋白表达量显著增加（P<0.01）,且MHC蛋白的免疫荧光蛋白染色检测观察到融合肌管的体积占比更大;而LncRNA-133a抑制处理组MyoD、MyoG及MHC的mRNA表达水平均降低,其中MyoG显著降低（P<0.05）, MHC蛋白表达量显著减少（P<0.01）,同时MHC蛋白融合肌管的体积占比也降低。【结论】 研究证实LncRNA-133a具有促进牛骨骼肌卫星细胞增殖及分化的作用,为进一步挖掘LncRNA-133a调节牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控网络机制奠定了基础。     

肉牛分子育种研究进展与展望

分子育种是家畜品种改良的一门新兴学科,其在牛的肉质性状和生长发育等研究中起到了一定的促进作用。概述了与肉牛相关的分子标记与分子育种的最新研究成就,重点介绍了肉牛生长及与生产性状相关的研究进展,包括肉牛候选的分子标记、全基因组选择,生产性能有关的微卫星标记,非编码RNA作为分子育种新标记以及通过转基因技术来改良肉牛重要生产性状等内容。     

转脂肪酸结合蛋白基因对小鼠生长发育影响的研究

本研究通过对转脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding protein,FABP）基因2个子代小鼠的心脏、肝脏、骨骼肌、子宫、卵巢进行组织切片、傅里叶红外光谱及表观生长发育指标的检测与分析,结果表明,转FABP基因小鼠与非转基因小鼠无显著差异,可稳定遗传。     

不同舍温对猪生产力及生长发育规律的影响

本试验研究了不同舍温变化对母猪生产性能及仔猪发育情况的影响,以及温度对生长猪日增重的影响和断乳仔猪的生长规律。试验结果表明：军牧一号母猪冬季窝产仔数多,但仔猪的成活率,健仔率低,夏季窝产仔数少,但成活率和健仔率高,春秋季成活率、健仔率偏低,与其它两季比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）仔猪初生重和断乳体重大。     

干扰核心蛋白聚糖对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

为探究肌肉生长抑制素(MSTN)对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究以前期MSTN^+/-蒙古牛与野生蒙古牛腿臀肌肌肉组织定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学筛选获得的表达差异倍数较大的核心蛋白聚糖(DCN)为靶标,以实验室前期分离培养的牛骨骼肌卫星细胞及建立的体外诱导成肌分化模型为对象,通过对设计合成的3个DCN siRNA干扰效果的筛选,将干扰效果最显著的si-DCN-2(si-DCN)转染牛骨骼肌卫星细胞。采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测增殖期(GM)牛骨骼肌卫星细胞中增殖标志因子Pax7和MyoD的mRNA水平及蛋白水平的表达变化,以及使用EdU染色的方法检测干扰DCN对细胞增殖的影响。对转染DCN siRNA的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化第3天(DM3)的肌管形成状态,同时采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分化标志因子MyoG和MyHC的mRNA水平及蛋白水平的表达变化,并对DM3期肌管MyHC进行免疫荧光染色,以研究干扰DCN对细胞分化的影响。结果显示,干扰DCN表达后,增殖期牛骨骼肌卫星细胞中Pax7和MyoD的mRNA水平及蛋白水平都显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01),且EdU阳性细胞率显著增加(P<0.05),表明干扰DCN表达显著促进了牛骨骼肌卫星细胞的增殖。干扰DCN表达后,牛骨骼肌卫星细胞分化第3天诱导形成的肌管直径呈现增大趋势,检测成肌分化标志因子MyoG在mRNA和蛋白水平的表达分别极显著和显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),MyHC在mRNA水平显著降低(P<0.05),但在蛋白水平上极显著升高(P<0.01),免疫荧光结果显示,下调DCN后肌管融合指数显著高于对照组(P<0.05),说明干扰DCN表达能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本研究结果表明,干扰DCN可以显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程。研究结果为进一步开展MSTN对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控机制研究奠定了基础。     

乌苏市探索草原生物治蝗途径成效显著——引进朗德鹅、红嘴雁新品种效果试验

通过开展引进朗德鹅、红嘴雁生物治蝗新品种效果试验,并对其增重、补饲、放牧管理、野外环境及适应能力等多方面的观察,从而得出,朗德鹅、红嘴雁生物治蝗新品种治蝗效果好,值得在牧区大规模推广,其经济效益和社会效益十分显著。     

秋延茬大棚番茄高产栽培技术

<正>1合理茬口安排番茄忌连作,每次种植茬口间隔两茬作物,要求前茬作物不能是茄科作物,最好是葱蒜类。2品种选择秋茬番茄栽培,生育前期遇高温、暴雨,生育后期受阴雨寡照的影响,应选择抗病性强,丰产性、耐贮性和商品性好的厚皮品种。目前,在榆林表现较好的品种有:佳粉10号、金棚1号、中杂9号、威敌3号等,这些品种在高温条件下坐果力强,果个较     

案件胜诉后的冷静思考

2005年11月1日，河南省许昌市七里店乡崔代张村村民刘某、周某之子刘某某（2岁）在村上玩耍，不慎掉进已拔的电线杆杆坑内，经抢救无效窒息死亡。2006年2月27日，刘某、周某将许昌供电公司作为第一被告（第二、三、四、五被告分别为农电工张某、许昌供电公司郊区分局、七里店供电所、许昌市魏都区七里店乡崔代张村第四村民小组）诉至许昌市魏都区人民法院，请求判令被告连带赔偿原告各种费用共计210155元（其中包括丧葬费6057元、死亡赔偿金154098元、精神抚慰金50000元）。     

提高畜禽产品质量的措施

20世纪末我国畜产品的生产在数量上已基本满足人们需要，人们对畜产品的要求已逐渐由数量转为质量，开始追求瘦肉乃至高档分割肉（如眼肌肉），喜欢高蛋白、低脂肪、低胆固醇的畜产品，对畜产品的卫生质量也提出了更高的要求。但目前有许多畜产品质量仍然低劣，卫生不能达标，或含脂类物质太高，或有药物残留，严重制约了人们对畜产品的消费和我国畜产品的出口。因此，提高畜产品的质量，降低药物残留，生产高品质肉、奶、蛋对促进国民消费，增强产品国际竞争力具有重大意义。国家科委在“九五”期间就制定了一系列攻关项目就提高畜产品质…