布鲁氏菌分泌蛋白BspI生物信息学分析及多克隆抗体制备

【目的】试验旨在对布鲁氏菌分泌蛋白BspI进行生物信息学分析,构建原核表达载体,获得BspI蛋白并制备其多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】使用在线软件对BspI蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,参照布鲁氏菌16M株BspI基因序列(GenBank登录号:DK63_1233)设计引物,PCR扩增目的基因后连接至pMD19-T克隆载体并筛选阳性克隆,将目的基因连接到pET-28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG诱导蛋白表达,并进行SDS-PAGE分析,用镍柱亲和层析方法纯化蛋白,纯化后的蛋白与弗氏佐剂混合免疫试验兔,采血分离血清,通过Western blotting、间接ELISA法进行多克隆抗体特异性及抗体效价分析。【结果】BspI蛋白为不稳定亲水性蛋白,存在跨膜结构,无信号肽区域,有13个磷酸化位点和7个抗原决定簇,二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲组成。PCR成功扩增出675 bp的BspI基因,成功构建了pET-28a-BspI表达载体。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,成功表达出25.3 ku的蛋白,纯化后无明显杂带,制备的多克隆抗体能够特异性地与BspI蛋白结合。间接ELISA结果显示,BspI蛋白多克隆抗体效价为1∶409 600。【结论】制备的兔源BspI蛋白多克隆抗体可以特异性识别BspI蛋白,该蛋白具有较好的反应原性。试验结果为进一步研究BspI蛋白在布鲁氏菌的胞内寄生中发挥的作用提供了参考。     

被动采样技术评价水生环境中拟除虫菊酯生物有效性的研究进展

拟除虫菊酯作为一类广谱杀虫剂，已大量应用于农林业及卫生领域，在各地区的水生环境中被频繁检出。同时，拟除虫菊酯易在水生生物体内富集且产生较高毒性。拟除虫菊酯属于强疏水性化合物，在使用常规化学分析方法分析其在环境介质中的总浓度时，往往会高估其环境风险。近20年来，生物有效性已被广泛用于疏水性有机污染物的环境风险评价。被动采样技术是待测物自发地由采样介质向采样器传输的一种采样技术，通过被动采样技术测定的拟除虫菊酯自由溶解态浓度比总浓度更能准确地反映其生物有效性。本文综述了利用被动采样技术评价水生环境中拟除虫菊酯生物有效性的最新研究进展。首先简单阐述了用于评价水生环境中拟除虫菊酯生物有效性的被动采样技术的基本原理，然后详细讨论了常用被动采样器的基本性能和应用特点，详细介绍了被动采样技术在水中拟除虫菊酯残留监测、水生生物毒性评价和积累量预测方面的应用，最后展望了这一技术在我国未来的发展方向。     

富硒黑木耳硒多糖对鲤鱼镉暴露的减毒作用

为了探究富硒黑木耳硒多糖对鲤鱼镉暴露的减毒作用，本试验选取540条鲤鱼分为6个组，分别为对照组、富硒黑木耳硒多糖组、未富硒黑木耳多糖组、镉暴露组、镉暴露富硒黑木耳硒多糖组和镉暴露未富硒黑木耳多糖组，其中镉暴露剂量为1 mg/L,多糖和硒多糖分别加入基础日粮，多糖组添加3 g/kg多糖，硒多糖组添加3 g/kg多糖和8.1μg/kg硒，试验周期为60 d。分别在试验30和60 d时，采集脾脏、肝脏、鳃、肾脏、大脑、肌肉和血液样本，检测各样本中镉浓度，血液红细胞数量、白细胞数量和血红蛋白含量，大脑乙酰胆碱酯酶、Na⁺/K⁺-ATP酶、多巴胺和5-羟色胺含量；在试验60 d时，采样的同时称取体重和肝胰脏重量，计算增重、生长速率、肝胰脏指数和饲料转化率。结果显示，与镉暴露组相比，富硒黑木耳硒多糖或未富硒黑木耳多糖能够显著降低组织和血液中镉浓度(P<0.05)、提高血红蛋白含量(P<0.05)、降低白细胞数量(P<0.05),提高大脑中乙酰胆碱酶、多巴胺、Na⁺/K⁺-ATP酶和5-羟色胺含...     

基于微生物16SrRNA测序技术对ICR小鼠传代后肠道菌群变化的分析

为探讨不同代次雄性ICR小鼠生长发育与其肠道微生物的关系，本研究通过对16SrRNA基因V3~V4区测序，分析F0到F3代雄性ICR小鼠肠道菌群多样性和菌种组成。结果显示:1)从F0到F3代，组间微生物的Alpha多样性中的Chao1指数，Observed-species指数和香侬指数(Shannon)指数随代次积累显著降低(P<0.05)，Simpson指数无显著差异(P>0.05)。2)从F0到F3代的优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)(F0、F1、F2和F3丰度分别为83.3%、79.0%、81.8%和90.3%)和拟杆菌门(Bacteroides)(F0、F1、F2和F3丰度分别为6.0%、5.1%、4.0%和3.2%)。3)F0，F1和F2代三组的优势菌属均为乳酸菌属(Lactobacillus)(F0、F1和F2丰度分别为83.1%、62.8%和38.2%)，但F3代的一些未确认分类的菌属占比较高，丰度约为45.3%；从F0到F3代在属水平上微生物组成上存在显著差异(P<0.05)，各组的乳酸菌属丰度随代次的积累显著降低(P<0.05)。4)对差异菌属进行了KEGG差异代谢通路预测，发现乙醛酸盐代谢、胰岛素信号通路、苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸生物合成途径，萜类化合物生物合成途径，肽聚糖生物合成和糖酵解糖异生作用在F3代中显著降低，表明F3代氨基酸合成、糖类代谢等多条基础代谢通路受损。综上，本研究基于微生物16SrRNA测序技术对ICR小鼠传代后肠道菌群变化进行了一系列分析和功能预测，发现微生物多样性发生改变，F0至F2代优势菌门未发生明显变化，但在F3代出现了较多的为确认分类菌属，并且在属水平上各组的乳酸菌属丰度随代次的积累显著降低，F3代氨基酸合成、糖类代谢等多条基础代谢通路受到影响。本研究有助于从肠道微生物与宿主间的相互作用角度解释ICR雄性小鼠传代后出现的体重偏低等现象产生的原因。     

长江流域棉区带状间作对棉花生长、产量及棉田经济效益的影响

【目的】探究长江流域棉区带状间作模式下棉花的产量形成机理，为间作模式在棉田中应用提供参考。【方法 】设置棉花-辣椒（CCI）、棉花-菜豆（CBI）、棉花-花生（CPI）、棉花-甘薯（CSI）4种间作模式和棉花单作（MC），比较分析不同模式下棉花光合特性、干物质积累与分配、产量及产量构成因素，并计算比较不同模式下的棉花偏土地当量比和经济效益。【结果】CCI、CBI处理下籽棉产量分别是6 055.19 kg·hm-2和6 495.81 kg·hm-2，较MC分别增加2.36%和9.81%，主要是因为这2种模式下棉花单株成铃数较MC分别增加1.61%和11.21%。而CPI、CSI处理下棉花单株成铃数、铃重分别比MC降低2.18%、8.98%和2.59%、5.60%。盛铃期，各间作模式的棉花叶面积指数表现为CBI>CCI>CPI>MC>CSI，其中CCI和CBI处理较MC的棉花叶面积指数显著增加5.88%和9.80%。CCI、CBI、CPI处理下棉花叶片SPAD值和净光合速率在盛花期较MC分别提高8.51%、7.65%、6.37%和11.55%、8.31%、4.02%...