微滴式数字PCR定量检测滑液囊支原体方法的建立及应用

为绝对定量滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS），试验根据已发表的MS VlhA基因序列，针对其保守区域分别设计了1对特异引物和1条探针，建立了ddPCR定量检测MS的方法，并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示：建立的方法最佳引物浓度为20μmol/μL，最佳探针浓度为10μmol/μL，最佳退火温度为54℃；该方法仅检测出MS毒株，不能检测出其他禽源病原，MS重组质粒标准品最低检测限为3.5拷贝/μL,3个连续稀释的MS重组质粒DNA检测的变异系数均小于5%;45份病鸡喉拭子、肺脏及关节囊样品检测结果显示，该方法的MS阳性检出率（11.1%）高于荧光定量PCR(8.9%)。结果表明，建立的ddPCR方法定量检测MS特异性强、敏感性高、重复性好，为绝对定量MS提供了适合的技术手段。     

二重荧光RT-LAMP鉴别检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体

本研究旨在建立一套通过添加荧光探针FD,反应后可使用成像仪直接观测结果的鉴别检测禽呼肠孤病毒(ARV)和鸡滑液囊支原体(MS)的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据ARV和MS的保守基因片段，设计了2套LAMP引物，并各添加1条FD荧光探针，2条FD探针分别标记CY5和6-FAM荧光基团。结果：ARV阳性对照在成像仪下发出红色荧光，MS阳性对照发出绿色荧光，双重模板经过图像融合后为黄色荧光；特异性结果显示，该二重荧光RT-LAMP检测方法仅能扩增ARV和MS两种病原，对其他常见病原如鸡毒支原体(MG)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)等无扩增反应；敏感性结果显示，该二重荧光RT-LAMP检测方法对ARV和MS的最低检测量分别为1.7×10² copies和1.9×10² copies;使用该方法检测40份临床样品，检出率与本实验室前期建立的二重荧光RT-PCR检测结果相同。综上，该二重荧光RT-LAMP检测方法可特异、敏感地鉴别检测ARV和MS,通过添加FD荧光探针和成像仪观测结果，为不同条件的实验室提供了新的检测手段。     

广西鸡源肠炎沙门氏菌的分离与鉴定

对广西壮族自治区3个鸡场疑似沙门氏菌感染发病鸡进行细菌分离，并对分离菌株进行染色镜检、生化实验、血清学鉴定、DNA测序、动物回归试验和药敏试验。结果共分离到6株沙门氏菌，生化特征和血清学特征符合肠炎沙门氏菌特性；DNA测序结果与肠炎沙门氏菌同源性为100%;动物回归试验表明，分离菌株能致死SPF鸡，并复制出与临床表现一致的病例；药敏试验结果表明，分离菌株对诺氟沙星和阿米卡星高度敏感，为广西地区鸡源沙门氏菌病的防治提供参考依据。