兴义鸭LPL基因外显子8多态性与生长和肉质性状的关联性分析

脂蛋白脂酶（LPL）是动物脂质沉积和新陈代谢的关键酶,对生长和肉质发挥着重要作用。试验采用PCR-SSCP法和DNA直接测序技术相结合对兴义鸭LPL基因外显子8进行多态性检测,并分析其多态与生长和肉质性状的关联性。结果表明,在兴义鸭LPL基因外显子8首次检测到1个T1251C同义突变,产生三种基因型TT、TC和CC,2个等位基因T和C,基因型TT和等位基因T的频率分别为0．8077和0．8750,多态信息含量为0．1948,表现为低度多态,卡方（X2）检验表明T1251C位点的基因型分布在兴义鸭中未偏离Hardy-Weinberg平衡。最小二乘分析显示,TT基因型个体的宰前体重显著低于CC基因型（p〈0．05）,胸宽显著低于TC基因型白〈0．05）,推测等位基因C可能是兴义鸭生长性状的有利等位基因,可作为生长性状的一个标记性辅助选择位点。     

高坡猪GH基因不同基因型对其部分生产性能的影响

采用PCR-RFLP-ApaⅠ方法检测高坡猪GH基因-119~ 486 bp片段的多态性,探讨了不同基因型对其部分生产性能的影响。结果表明:产生2个等位基因A(449 bp)和B(316 133 bp),其频率分别为0.54和0.46;3种基因型:AA、AB和BB,其频率分别为0.26、0.56和0.18;除6月龄腹围和背膘厚外,其余指标值均以BB基因型最高,AA基因型的6月龄腹围和瘦肉率与BB基因型相比差异显著(P<0.05),其他指标在各基因型间差异均不显著(P>0.05)。表明,A可能是小型猪的有利等位基因,B则可能是大型猪的有利等位基因。     

鸭LXRα基因过表达对原代肝细胞及PC3细胞脂质代谢的效应研究

旨在探究鸭LXRα基因对脂肪代谢的表达调控机制,本试验以pEGFP-N3为载体,构建携带HIS标签的LXRα基因真核过表达载体,并将过表达载体分别转染鸭原代肝细胞及PC3细胞,使用鸭HIS标签试剂盒测定LXRα基因在肝细胞及PC3细胞中的过表达量,分析该基因分别在两种细胞中过表达与各脂质指标含量的相关性,进而探究其对鸭肝细胞及PC3细胞脂质代谢的调控作用。试验结果显示,LXRα基因在两种细胞中过表达与三酰甘油含量(triglyceride,TG)及高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)含量均呈极显著正相关关系(P<0.01),与总胆固醇(total cholesterol,TC)含量及低密度脂蛋白含量(low density lipoprotein,LDL)则均呈极显著负相关关系(P<0.01)。本研究揭示了LXRα基因过表达对TG和HDL的合成代谢有重要的正向调控作用,对TC和LDL具有反向调控作用,且在这两种类型的细胞中调控机制相似。这一研究结果将对今后深入研究LXRα基因在脂质代谢网络通路中的作用及解决鸭体脂肪过度沉积等问题奠定理论基础。     

长顺绿壳蛋鸡FGF23基因遗传变异分析

为进一步了解长顺绿壳蛋鸡FGF23基因的遗传效应,试验随机抽取同日出雏、健康无病、同等管理条件下饲喂10周龄的100只长顺绿壳蛋鸡,翅静脉采血,提取DNA,采用混合基因池进行PCR扩增,结合直接测序法对FGF23基因进行单核苷酸多态性(SNP)筛查。结果表明,在长顺绿壳蛋鸡FGF23基因启动子区共筛查到3个SNP突变位点(g.73424388,TC;g.73424577,TC;g.73424660,GC),其中,g.73424388和g.73424660两个突变位点呈中度多态,g.73424577呈低度多态,说明长顺绿壳蛋鸡在自然群体中的遗传多样性较为丰富。     

番鸭A-FABP基因部分序列多态性与屠宰、肉质性状和血清甘油三酯含量关系

根据家鸭A-FABPmRNA序列和鸡A-FABP基因组序列设计1对引物扩增番鸭A-FABP基因内含子1序列。同时根据扩增产物设计5对引物,利用PCR-SSCP对番鸭A-FABP基因部分进行多态性研究及多态性与部分屠宰性状、肉质性状、胸肌肌内脂肪含量和血清甘油三酯含量关系。结果显示,克隆序列包含番鸭A-FABP基因外显子1、2部分序列和完整的内含子1序列,与家鸭和鸡A-FABP基因内含子1分别有序列94.43%和72.95%的同源性;经SSCP检测,在引物P3扩增片段上发现2处碱基突变:分别为1074处T-G和1089处A-C突变,这2处突变产生3种基因型AA、BB和AB型,χ2检验显示番鸭群体符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05)。最小二乘分析显示,AA、AB型个体在胸肌率、肌肉pH值以及胸肌肌内脂肪含量均存在显著性差异(P0.05)。结果表明,番鸭A-FABP基因内含子1多态性可能对个体生产性能产生重要的影响。     

鸭ChREBP基因表达载体构建及其对原代肝细胞和PC3细胞脂质性状的影响

[目的]探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据.[方法]采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培养基进行培养.利用RT-PCR扩增鸭ChREBP基因编码区(CDS)序列,构建携带His标签的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His,通过脂质体法分别转染鸭胚原代肝细胞和人前列腺癌细胞(PC3);采用His标签检测试剂盒检测ChREBP基因的表达量,以脂质指标测定试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鸭胚原代肝细胞和PC3细胞中ChREBP基因表达与脂质指标含量的相关性.[结果]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞均能发出绿色荧光,表明携带His标签的ChREBP基因能在鸭原代肝细胞和PC3细胞中表达.ChREBP基因表达量与鸭原代肝细胞和PC3细胞中的TG、TC和HDL含量均呈极显著正相关(P<0.01,下同),与LDL含量呈极显著负相关.[结论]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞后均能发出绿色荧光,说明ChREBP基因表达对鸭原代肝细胞和PC3细胞中的脂质代谢作用机理相似,可促进细胞脂质累积.     

长顺绿壳蛋鸡SFRP5基因外显子1的SNPs鉴定及其与常规肌肉品质的关联性分析

分泌型卷曲相关蛋白-5(SFRP5)对畜禽脂质代谢起着至关重要的调控作用。为了探讨鸡SFRP5基因SNPs与肌肉品质的相关性,采用PCR产物直接测序法检测SFRP5基因外显子1的SNPs位点,分析其对长顺绿壳蛋鸡胸肌肌肉品质的影响。结果显示:在SFRP5基因外显子1的CDS区中发现3个SNP沉默突变位点:g.23251706 C>T为低度多态位点,g.23251882 C>T和g.23252056 C>T为中度多态位点;3个位点的等位基因C和基因型CC均处于优势地位,且基因型分布均未偏离Hardy-Weinberg平衡状态。连锁不平衡分析表明:3个SNP位点之间不存在强连锁不平衡,发现4种单倍型和10种双倍型,单倍型H1和双倍型H1H1频率最高。关联性分析结果表明:g.23251706C>T位点对胸肌蒸煮损失的影响达到显著水平(P<0.05),TT基因型有利于降低蒸煮损失;g.23252056C>T位点则对失水率的影响达到显著水平(P<0.05),TT基因型有利于提高肌肉保水力;3个SNP位点联合组成的双倍型对胸肌的5个常规肉品质指标均有不同程度的影响。综合所有指标在双倍型之间的差异,双倍型H2H2是改善长顺绿壳蛋鸡肌肉品质最有利的双倍型,揭示在SFRP5基因外显子1中发现的3个SNP位点相互联合能显著影响肉质,可作为鸡肌肉品质选择的遗传标记。     

长顺绿壳蛋鸡OCX-32基因变异对蛋壳品质的效应研究

为了进一步了解蛋壳基质蛋白OCX-32基因对鸡蛋壳品质的遗传效应,试验以长顺绿壳蛋鸡为研究对象,在测定蛋壳质量后翅静脉采血提取DNA,采用PCR扩增并结合PCR产物直接测序法对OCX-32基因进行单核苷酸多态性(SNP)筛查及与蛋壳品质的关联分析。结果表明:在长顺绿壳蛋鸡OCX-32基因中检测到2个SNP位点,即位于外显子4的g.22 598 071 CT错义突变,产生2种基因型(CC和CT),其中C为优势等位基因,其频率为0.900,属于低度多态位点;位于内含子4的g.22 598 730TA突变,产生3种基因型(TT、TA和AA),T为优势等位基因,其频率为0.650,属于中度多态位点。关联性分析结果显示,g.22 598 071 CT位点对长顺绿壳蛋鸡蛋壳强度、蛋比重、蛋壳比例和蛋白高度有显著影响(P0.05),g.22 598 730 TA位点对长顺绿壳蛋鸡的蛋品质10个指标无显著影响(P0.05)。说明g.22 598 071 CT位点可能作为鸡蛋壳品质选择的一个遗传标记,OCX-32基因与长顺绿壳蛋鸡蛋品质存在一定的相关性,可作为发掘长顺绿壳蛋鸡蛋品质的分子育种标记。     

鸭Fas基因SNP和生物信息学研究

试验以鸭为研究对象,构建DNA池,对Fas基因第2外显子、第3外显子和跨第6、第7外显子设计引物,PCR结合直接测序技术,筛选与扩增产物存在的SNP位点。结果表明:Fas基因第2外显子中检测到1个SNP位点(T729A),且引起天冬氨酸(GAT)转变为谷氨酸(GAA);mRNA二级结构最小自由能增加了133.76 k J/mol,α螺旋和延伸链含量和所占蛋白质二级结构比例增加0.53%和0.27%,而自由卷曲数量减少了0.80%,且蛋白质三级结构发生明显变化,有可能影响Fas功能,从而对机体代谢产生影响。