病毒样颗粒技术应用的研究进展

病毒样颗粒 (Virus_LikeParticles,VLPs)或核心样颗粒 (Core_LikeParticles ,CLPs)是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒 ,没有病毒的核酸 ,不能自主复制 ,其在形态上与真正病毒粒子相同或相似。目前多数病毒的VLPs在真核表达系统以及少数病毒的VLPs在原核表达系统中都能够有效地实现自我组装 ,这为病毒的基础研究及疫苗的开发提供了便利条件。该技术自 2 0世纪 80年代一出现就受到了人们的普遍重视。目前VLPs已应用于多种病毒的基础研究、形态发生学、疫苗制备和免疫特性的研究。1　VLPs在基础研究中的应用目前 ,对多种…     

灯盏花根际土壤3种垫刃线虫的鉴定

 灯盏花[Erigeron breviscapus (Vaniot) Hand.-Mazz.],又名灯盏细辛、短葶飞蓬,是一种多年生野生草本植物,属菊科(Compositae) 飞蓬属(Erigeron),产于湖南、广西、贵州、四川、云南、西藏等省区,常见于海拔1 200~3 500 m的中山和亚高山开阔山坡、草地、林缘^[1],具有重要的药用价值,被列为国家重点发展的中草药品种和中医治疗心脑血管疾病临床必备急救药品。     

H5N1亚型禽流感病毒HA基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究

采用RT-PCR技术扩增了高致病性禽流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04（H5N1）HA基因,然后将其克隆到真核表达载体pCI-neo中,获得重组质粒pCI-HA。在脂质体介导下转染Vero细胞,单抗免疫组化IPMA结果表明,HA蛋白在VeroE6细胞上大量表达。pCI-HA质粒在有或无脂质体佐剂存在下以50μg剂量免疫接种Balb/c小鼠和SPF鸡,对照组只接种50μgpCI-neoDNA,各组以相同剂量加强免疫两次,每次免疫间隔3周。每次免疫前采集血清用ELISA检测抗体效价。最后一次免疫后3周用10^6EID50的高致病性流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04（H5N1）进行攻毒试验。免疫组小鼠抗体效价与对照组相比明显升高,但脂质体佐剂免疫组与非脂质体免疫组小鼠抗体效价差异不显著,基因免疫组小鼠能够抵抗H5N1高致病性禽流感病毒的致死性攻击。该核酸疫苗虽然能够诱导SPF鸡产生抗体应答,但抗体产生缓慢,效价较低。     

不同试剂对灯盏花种子萌芽的影响

[目的]采用培养皿发芽法,研究不同试剂对灯盏花种子萌芽的影响。[方法]用GA3、CuSO4、NaOH分别处理灯盏花种子15min,并以清水处理为对照。[结果]各种试剂对灯盏花种子萌芽均有明显的促进作用,其中赤霉素对灯盏花萌芽的促进效果最为显著,发芽势、发芽率均有明显提高。[结论]在该试验中,1g/LGA3处理对促进灯盏花种子萌芽的效果最佳。     

4株不同亚型流感病毒NP基因的原核表达

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,H1N1亚型流感病毒NP蛋白得到表达,并且能分别与H1N1和H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而H3N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒的重组NP蛋白未获得表述.本研究结果表明,不同毒株的NP蛋白在大肠埃希菌中的表达具有一定差异性,为把NP蛋白作为诊断抗原的开发、ELISA诊断方法的建立以及蛋白功能的研究奠定了基础.     

同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。     

H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定

为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。     

抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体重链基因的克隆及序列分析

为获得抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(MAb)重链可变区基因,提取MAb杂交瘤细胞8C4总RNA,通过RT-PCR扩增其重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列包含CDR1、CDR2、CDR33个高变区,CDR1含GYTFTSYY 8个氨基酸、CDR2含IYPGDGST 8个氨基酸、CDR3含ARVMIAMDY 9个氨基酸。第22位和96位为骨架区的2个半胱氨酸,形成链内特征性二硫键。该序列符合鼠Ig重链基本框架结构,框架区内无终止密码子,为重排产生的序列。本实验获得的重链序列为研制基因工程抗体奠定了物质基础。     

云南省灯盏花根际土壤螺旋线虫的鉴定

首次报道了灯盏花根际土壤的1种螺旋线虫:双宫螺旋线虫[Helicotylenchus dihystera(Cobb,1893)Sher,1961]。灯盏花是这种线虫的新记录寄主。