流感病毒H1/H3亚型通用双重短探针实时RT-PCR检测技术与标准质控品研究

采用TaqMan方法,在对人、禽、猪以及马流感病毒代表株HA序列多重比对基础上,设计合成动物流感病毒H1亚型和H3亚型的兼并引物和LNA和MGB修饰短探针,经反应条件优化,建立了针对流感病毒H1亚型及H3亚型的双重实时RT-PCR检测方法.应用建立的方法分别对人、禽、猪以及马流感病毒核酸进行检测,结果显示,建立的方法通用性良好,可有效检测和鉴别H1和H3亚型流感病毒,但对其他亚型的流感病毒以及新城疫病毒核酸检测结果为阴性,表明建立的方法特异性强.进一步经体外转录制备了猪流感病毒H1和H3亚型HA完成编码区的核酸标准品cRNA,经稀释、分装、定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,所建立的双重短探针实时RT-PCR方法灵敏度可达2.0×102拷贝/反应.在对586份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足动物流感病毒H1/H3亚型的早期快速检测的需求.     

陇南山区核桃生态气候适宜性区划研究

通过对陇南山区2012—2015年核桃全生育期的气象和植物学特性的系统观测资料对比分析,得出核桃生长关键时段以及对其生长影响相关性最大的气象因子为年平均气温、年降水量、4月平均最低气温和7月平均气温,以此建立了更加切合陇南山区实际的核桃生态气候适宜性区划指标体系,并基于GIS技术制作出精细化核桃种植气候适宜性区划图。结果表明：陇南市康县、成县大部和徽县中南部、武都南部及白龙江流域、文县南部及白水江流域等地海拔1000~1600 m的平川、浅山、丘陵、深山地带为核桃最适宜种植区;康县、成县和徽县北部、礼县、西和中南部、两当县大部、宕昌中部、武都中部及白龙江流域、文县中部及白水江流域等地海拔900~1000 m和1600~1800 m的谷地及半山区为核桃适宜种植区。研究结果对指导陇南山区科学规划、合理布局、充分利用气候资源发展核桃产业,预防和减轻气象灾害损失提供了科学依据。     

口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究

从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应.进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清.     

常见肉类成分荧光PCR检测试剂盒的比较

目前市场上肉类成分检测试剂盒种类繁多。为了评价不同厂家试剂盒的应用效果，选取当前市场上4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒，对其特异性、灵敏性及效率成本进行了分析比较。结果显示：4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒特异性均较好，不同肉类之间没有交叉反应；但检测同一种肉类的不同品牌试剂盒及同一品牌检测不同肉类的试剂盒灵敏性存在差异；不同品牌的试剂盒检测时间和成本也有区别，A品牌耗时最短，D品牌价格最高。结果表明，不同品牌试剂盒的灵敏性、检测耗时和检测成本各有特点，使用者可根据使用目的及经费预算选择合适的试剂盒。