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【目的】实时定量 PCR结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性,筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段,包括14-3-3、18S核糖体 RNA(18SrRNA)、β-actin (Actin)、延长因子1-α(EF1-α)、真核起始因子4A (eIF4A)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、RNA聚合酶-Ⅱ(RPⅡ)、60S核糖体蛋白(RPL7)、翻译延长因子2(TEF2)、泛素连接酶 E2(UBCE)、泛素(UBQ)和泛素延伸蛋白5(UBQ5)。采集牛奶子5个不同器官(根、茎、叶、花和红果)、4个成熟期的果实(绿果、黄果、深粉果和完全成熟的红果)、2种激素(脱落酸、赤霉素)处理4个时间点的绿果、热处理4个时间点的离体叶片、幼苗盐胁迫2个时间点的根茎叶,应用实时荧光定量 PCR 技术检测12个内参基因在各样品中的表达情况,采用基于 CT值的 geNorm、Normfinder和 BestKeeper及 CT比较4种算法评价这些内参基因的稳定性,最终的排名则由 RefFinder算法产生。【结果】器官组稳定性好的前2位内参基因为 UBCE和 RPL7,果实成熟期组排名前2的为eIF4A和UBCE,激素处理组排名前2的为eIF4A和UBCE,非生物胁迫组排名前2的则为 Actin和 EF1-α,综合分析所有样品排名前3位的是 eIF4A、RPL7和 UBCE。分别用筛选出的稳定的eIF4A、RPL7、UBCE和不稳定的 RPⅡ作为内参基因评价目的基因八氢番茄红素合成酶基因 EutPsy 在果实成熟过程中的表达,结果显示分别以3个稳定的内参基因为单内参基因与以 eIF4A 同 UBCE 组合做内参基因所得到的结论一致,而 RPⅡ给出的则不同。【结论】在应用荧光实时定量 PCR技术研究牛奶子基因转录表达时,通常情况下eIF4A、RPL7和 UBCE相对于其他9个候选内参基因更为可靠。研究结果为牛奶子及胡颓子属其他物种的基因表达分析奠定基础。 相似文献
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针对计算机辅助设计网络环境的构建问题,采用以信息传递为主体的分析方法,对此进行了较为深入与全面的研究;并对其中的数据库建立进行了系统的分析和讨论,给出了一个可行的网络设计环境的解决方案。 相似文献
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[目的]研究青贮竹笋下脚料的营养价值及其在湖羊饲料中的适宜添加比例。[方法]首先,在新鲜竹笋下脚料中添加麸皮和草粉进行青贮,45 d后开窖进行营养价值评定;然后,用青贮竹笋下脚料分别替代0(对照组)、10%(试验A组)、20%(试验B组)、30%(试验C组)的湖羊精料进行饲喂试验,预试期7 d,试验期30 d。[结果]青贮后结构湿润致密,pH 3.9,氨态氮含量8.93%,说明青贮品质优良;青贮后干物质含量为23.8%、粗蛋白含量为16.7%、粗纤维含量为34.8%,营养价值高于青贮玉米,与青贮苜蓿相接近;各试验组湖羊的总增重与对照组相比有所提高但差异均不显著(P>0.05),其中试验B组湖羊的平均日增重最大,为206.00 g;与对照组相比,各试验组血清总胆固醇、总蛋白及甘油三酯含量略有提高,尿素氮含量有所下降(P>0.05);各组血糖含量无显著差异(P>0.05)。[结论]该试验条件下用青贮竹笋下脚料分别替代湖羊日粮中10%、20%、30%的精料,对湖羊平均日增重及血清生化指标均无显著影响,但试验B组提高幅度最大,结合经济效益分析,青贮竹笋下脚料替代肉羊精料比例以... 相似文献
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“青心1号”系1999年从“广州小叶白心”群体中通过单株选拔,经10多年系统选育而成的无性系小叶绿茶品种。该品种属灌木型,早芽种,叶片椭圆,色泽墨绿,幼嫩芽叶深绿,分枝密度较大,产量高,品比三年平均每667m^2年产鲜叶223.6kg,比对照种福鼎大白增产14.7%。芽叶生化成分丰富而协调,茶多酚含量25.76%,氨基酸含量2.89%,制绿茶品质优异,采用不同工艺可加工成扁形绿茶、烘青绿茶和炒青绿茶,品质比福鼎大白和金萱高一个档次(5分)以上,成茶综合表现为外形墨绿,汤色深绿,叶底嫩绿,香气幽雅高长持久,滋味浓醇甘爽,极耐冲泡,色香味颇具特色,具有良好的开发前景。该品种抗逆性强,适应性好,适宜广东茶区生产应用。 相似文献