罗非鱼源蜡样芽孢杆菌分离、鉴定及药敏特性研究

从福建漳州某养殖场患出血病死亡的罗非鱼肝脏、肾脏及脾脏分离到一株致病性菌株FJLF。对该菌进行了形态特征观察、理化特性测定及16S rRNA序列分子鉴定。生理生化特征和16S rRNA基因序列分析结果显示,分离到的FJLF株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。人工感染该菌后发病鱼出现与自然发病类似症状,且从病灶中分离到与原感染菌一致菌株。腹腔注射后该菌株对罗非鱼的半致死剂量LD_(50)=2.30×10~6CFU/g。FJLF株对诺氟沙星、头孢噻肟、新霉素及卡那霉素等8种抗生素高度敏感;对环丙沙星、痢特灵、红霉素及链霉素中度敏感;对苯唑西林、青霉素、头孢拉定及阿莫西林等10种抗生素耐药。     

嗜水气单胞菌对中华鳖致病力的研究↑（*）

嗜水气单胞菌菌株Ｔ３、４０１４２Ｇ,５１６１３－１,７０６Ｃ,ＲＴＬ５３１,Ｒ４０２Ｌ,ＲＫ１１１９等分别从患有红底板、腐皮、洞穴及其它症状的病鳖中分离。银鲫对Ｔ３与４０１４２Ｇ的易感性最强,而中华鳖（与小白鼠、青蛙等一样）稍差。各嗜水气单胞菌菌株中,Ｔ３的致病力最强,其致病性随水温升高而增强,随其连续传代而减弱。该菌在用橡皮塞密封的试管中４℃存放时,４００ｄ内致病力基本保持稳定。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗旋转瓶法大规模生产工艺↑（*）

Ｃａｒｅｌ氏瓶静置培养草鱼ＣＩＫ细胞,细胞２～３ｄ内长成单层,细胞单层均匀而稳定;旋转瓶培养,细胞７ｄ左右长成单层,细胞单层面积大,病毒培养产量高。２种方式所培养病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。０．１％福尔马林４℃条件下灭活病毒材料１７ｄ制备疫苗,疫苗性能稳定,安全性好。疫苗效力检验结果表明,注射免疫１０ｄ和浸泡免疫１０ｄ后,免疫鱼体内血清中和抗体效价分别为１０７．９±１１．０（３）和６８．５±９．９（３）,免疫保护力分别为（７７．１±８．９）％（３）和（７３．９±８．３）％（３）,与对照组相比差异显著。本研究建立了草鱼细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺流程,进行了较大规模的疫苗生产和生产性免疫试验,免疫草鱼成活率平均达到８５％以上。     

解淀粉芽孢杆菌HE活性成分鉴定及抗菌特性分析

为明确解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HE发酵液中的活性成分及抗菌特性,根据解淀粉芽孢杆菌发酵液抑菌活性稳定性,用PCR检测脂肽合成相关的基因,再采用UPLC-Q-TOF-MS对活性物质进一步分析;用二倍稀释法测定脂肽对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并从显微结构上来探讨其抗菌作用。稳定实验表明该菌株产生抑菌活性物质对高温、酸、碱和蛋白酶具有一定的耐受性;4对引物的扩增产物经过克隆、测序和BLAST分析,表明解淀粉芽孢杆菌HE基因组含有ituA、fenB、sfP、mycB的脂肽合成相关基因;液质联用分析发现脂肽粗提物中含有Surfactin、Iturin和Fengycin这3类脂肽类抗生素;抑菌圈法测定抗菌脂肽对嗜水气单胞菌的MIC和MBC均为137.97μg·mL-1;显微特征表明脂肽可以导致嗜水气单胞菌细胞膜塌陷和孔洞。该研究结果可为解淀粉芽孢杆菌活性代谢产物结构鉴定和安全性评价提供参考。     

36种中药对罗非鱼源无乳链球菌体外抑菌及生物被膜消除效果

为了筛选出对无乳链球菌(Streptococcus agalactiate)有抗菌效果的安全新药物,实验采用琼脂扩散法和微量稀释法测定了36种中药单体对3株罗非鱼致病性无乳链球菌的抑菌活性,测定了血根碱对无乳链球菌生长曲线和生物被膜成膜的影响。结果显示:受试菌株对血根碱、白屈菜红碱、厚朴酚、和厚朴酚和大黄酸极度敏感,抑菌圈均在20 mm以上,5种药物对无乳链球菌的最小抑菌浓度(MIC)为8～32μg/mL,表现出很强的抑制作用,其中血根碱对3株无乳链球菌的最小杀菌浓度(MBC)均为16μg/mL;生长曲线及生物被膜试验发现血根碱对无乳链球菌生长和生物被膜生成具有抑制作用。在不同血根碱浓度下,与其他浓度组相比当血根碱浓度达到16μg/mL及以上时,受试菌株生物被膜的生成率降低到2.76%以下,相同条件下,绿原酸作用下生物被膜生成率均在90%以上。     

斑点叉尾鮰暴发性败血症病原的分离与鉴定

从3尾表现出血症状的患病斑点叉尾鮰（lctalurus Punctatus）体内各分离出一株病菌，测定结果显示致其急性死亡的致病菌为温和气单胞菌（Aeromonas sobria），慢性死亡的致病菌分别为嗜水气单胞菌（A．hydrophila）和温和气单胞菌（A．sobria）。药敏试验结果表明：3株菌对广谱抗生素如氨苄青霉素、青霉素、先锋霉素Ⅵ和红霉素等已产生耐药性，而对菌必治、头孢肤肟和复达欣等高度敏感；菌株Jh-1和菌株Yh-3对复方新诺明、四环素、氟哌酸和丁胺卡那霉素高度敏感，而菌株Jh-2却低度敏感；环丙沙星和诺氟沙星对3株致病菌均具较好的抑菌、杀菌作用。     

“鱼虾安”防治鱼病效果的评价研究

“鱼虾安”防治鱼病效果的评价研究艾晓辉（中国水产科学研究院长江水产研究所，荆沙市４３４０００）鱼虾安是山西鱼虾安水产药业有限公司生产的一种水产消毒剂，其化学名称为氯代异氰尿酸复合剂，该药物已在水产养殖生产中广泛应用，有必要对其防治鱼类疾病的效果进行评...     

吡喹酮不同给药方式对鲫的急性和亚急性毒性研究

研究了吡喹酮不同给药方式对鲫(Carassius auratus)的急性和亚急性毒性试验。急性毒性试验结果显示:浸泡时吡喹酮对鲫的24、48、96 h的半致死浓度(LC50)分别为54.80 mg/L、51.07 mg/L、50.78 mg/L;按每千克鱼体重10 g吡喹酮的剂量灌胃时,96 h未见明显中毒症状。亚急性试验结果显示:在不同的给药方式下,与对照组相比,低浓度的吡喹酮未对碱性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷丙转氨酶(ALT)的活性造成显著影响(P>0.05);随着试验时间的延长,较高浓度的吡喹酮使SOD活性先升高后降低,ALT活性显著(P<0.05)或极显著高于对照组(P<0.01)。     

水产品中磺胺甲噁唑与甲氧苄啶含量的高效液相色谱测定法

本文研究了一种快速、方便的同时测定鱼类肌肉中磺胺甲唑与甲氧苄啶的HPLC法 ,用二氯甲烷和醋酸钠溶液提取样品中的磺胺甲唑及甲氧苄啶 ,浓缩提取液至干 ,用乙腈磷酸水溶液溶解残渣并去脂肪后过滤 ,清液供HPLC分析 ,紫外检测器在 2 87nm波长下检测定量。肌肉中杂峰能很好地与药物峰分离 ,空白样品添加药物 ,方法回收率稳定在 75～ 85 % ,日内精密度与日间精密度均小于 5 % ,本方法可检出的样品中磺胺甲唑及甲氧苄啶低限为 0 0 0 8μg/g。     

4个不同地理种群中华鳖POMC基因全长cDNA克隆及其序列分析

为探讨中华鳖不同地理种群的POMC基因的多态性,建立区分中华鳖不同地理种群的分子遗传标记,采用RT-PCR的方法扩增得到4个不同地理种群(太湖鳖种群、沙鳖种群、台湾鳖种群和黄河鳖种群)中华鳖的POMC基因,对该基因进行克隆及序列测定,并对所测序列进行比较,分析其SNP位点,并对所得的SNP位点进行验证。结果显示:4个不同地理种群中华鳖所扩增的POMC基因的核苷酸序列均为786bp;以megalign软件比较分析4个不同地理种群中华鳖的POMC基因,发现该序列中共有15个多态性核苷酸位点,经过验证,第129位核苷酸的变异为台湾鳖种群不同于其他种群的变异,第441位核苷酸变异为太湖鳖种群不同于其他种群的变异,第168和396位核苷酸为黄河鳖种群不同于其他种群的变异,第531和618位核苷酸为沙鳖种群不同于其他种群的变异。结果表明,中华鳖的POMC基因存在多态性,不同地理种群中华鳖POMC基因均有各自特异的核苷酸序列,可以作为区分中华鳖的不同地理种群的分子遗传标记。