卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响.研究结果表明,将卵巢分别保存在25～29℃、30～35℃、36～40℃的生理盐水中运输时,卵母细胞体外成熟率分别为55.3%、70.1%、60.7%,各组间无显著性差异(P＞0.05);当将卵母细胞分别培养在无激素的对照组(TCM199 10?S)、添加雌二醇(estradiol)-17β组、LH 雌二醇-17β组时,卵子的成熟率分别为57.8%、64.3%、70.1%,对照组与LH 雌二醇-17β组差异显著(P＜0.05);卵母细胞各自培养22～25 h、26～30 h、31～34 h时,卵子体外成熟率分别为56.3%、65.4%、68.4%,3组间无显著差异(P＞0.05).     

冷冻保护剂对延边黄牛体外受精卵的影响

对延边黄牛体外受精卵进行了毒性实验,结果表明,延边黄牛体外受精桑椹胚在0.5M海藻糖(7.6%)和0.5M蔗糖(3.2%)溶液中的存活率差异不显著,早期囊胚在0.5M海藻糖(58.3%)溶液中的存活率显著高于0.5M蔗糖(34.5%)组,在同一处理内早期囊胚的存活率显著高于桑椹胚(P<0.05).以0.5M海藻糖为基础液,分别用0.0(对照组),2.0,2.5,3.0,3.5M甘油处理延边黄牛体外受精早期囊胚,其存活率对照组与不同浓度甘油组之间差异均不显著.     

小鼠体内卵母细胞死亡的形态变化研究

目前大多数研究主要是针对体外的卵母细胞凋亡,并且通常采用抗癌试剂来人为的引入。然而,对体内卵母细胞死亡的过程还不是很明确。为了查明体内未受精卵的死亡过程,我们检测了从输卵管壶腹部冲出的注射了HCG后不同间隔的卵母细胞中的细胞化学物质的改变情况。在每一个收集的时间段,在显微镜下将收集的卵母细胞从表观上分成四组:单细胞卵母细胞(没有激活和没有核或胞浆移动),激活的卵母细胞(带有核的单细胞,2-或4-细胞),碎裂的卵母细胞及其死亡的卵母细胞。随着时间的推移,单细胞卵母细胞的数量下降,死亡的卵母细胞数量增加,但是激活或碎裂的卵母细胞数量未发生改变。同时,检测到的大多数死亡的卵母细胞都是单细胞。在每一个时间点上,用抗微管蛋白抗体对单细胞卵母细胞进行着色,来检测它们的纺锤体状态。在注射HCG24h之后,大多数超排后的卵母细胞都有两极纺锤体,然而在超排后64h的单细胞卵母细胞就没有纺锤体。结果表明,大多数的体内卵母细胞在单细胞期就出现死亡,而激活或碎裂的卵母细胞则不是。     

影响核移植后小鼠重构胚存活因素的研究

将不同类型的供体细胞(卵丘细胞、心肌细胞和上皮细胞)的遗传物质注射到去核的MⅡ卵母细胞中,获得各种重构胚胎,以分析对小鼠卵母细胞进行核移植操作获得重构胚过程中的各种影响因素。结果表明,用Gi emas染料将挤出的卵母细胞质染色证实,可以完整地去除MⅡ卵母细胞核。对370个MⅡ卵母细胞进行去核,去核成功率为92.4%,注核成功率为82.1%;给予90 v/mm,80μsec,1次电脉冲刺激,融合率为72.1%;将融合激活后的重组胚转入KSOM培养基中,平均囊胚率达到35.8%。在胚胎重构过程中,出现了核仁显著变大,出现不同数量核仁的现象。通过比较各种重构胚胎体外后续发育,结果卵丘细胞重构胚胎的体外发育率最好。     

体细胞克隆的小鼠胚胎在附植前后发育的研究

采用成年小鼠的卵丘细胞核、胎儿成纤维细胞作核供体细胞来进行核移植,研究小鼠卵母细胞的去核程序和影响重构胚附植前发育的激活条件;随后将重构胚与供体细胞系共培养后获得囊胚阶段的小鼠重构胚,并将其移植到受体鼠体内后获得了24%克隆胚胎。结果表明,小鼠卵母细胞质能够进行重编程来支持早期的胚胎发育。     

边鸡微卫星DNA标记遗传多样性的研究

利用鸡基因组中5个微卫星标记,检测了边鸡群体的遗传多样性,并以大骨鸡做了比较分析。同时探讨了边鸡在国内5个地方鸡种中的系统地位。结果表明,5个微卫星位点共检测到38个等位基因,其中ADL0146位点的等位基因数最少(5个),而ADL0136和ADL0185两个位点的等位基因数最多(9个),平均等位基因数为7.6个.边鸡群体内比大骨鸡群体有更丰富的遗传多样性。聚类分析结果显示,边鸡与大骨鸡亲缘关系最近。而与鲁西斗鸡亲缘关系最远。     

甘氨酸及二甲基亚砜对冷冻保存兔精液活率的影响

在筛选出稀释液配方和平衡时间的基础上,探讨了不同浓度的甘氨酸及DMSO对冻融后兔精子活率的影响.试验结果表明:(1)在同一浓度的甘氨酸(分别为7.0mg·mL-1、7.5mg·mL-1和8.0mg·mL-1)条件下,解冻后精于活率与DMSO浓度呈负相关,各组彼此差异显著(p＜0.05).(2)当DMSO浓度为7.5％时,不同甘氨酸浓度对精液冷冻效果差异不显著(P＞0.05);当DMSO浓度为10％时,甘氨酸浓度为7.5mg· mL-1组的解冻后精子活率49.82％最高,其次是7.0mg·mL-1组43.41％,8.0mg·mL-1组37.29％最低,且各组间差异显著(p＜0.05);当DMSO浓度为12.5％时,甘氨酸浓度7.0mg·mL-1组的解冻后精子活率26.69％显著低于7.5 mg·mL-1组和8.0mg· mL-1组(P＜0.05),而7.5mg· mL-1组(32.97％)和8.0rng·mL-1组(34.64％)间无显著差异(P＞0.05).综上所述,獭兔精液冷冻保护液中添加7.5mg· mL-1甘氨酸和7.5％ DMSO,可得到较好冷冻保存效果.     

猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养卵丘细胞凋亡检测

为了验证猪COCs在体外成熟过程中是否存在细胞凋亡的现象及其生物学特征,筛选快速、准确的检测卵丘细胞凋亡的方法,本试验将体外培养的猪COCs采用电子显微镜(EM)技术、苏木素-伊红(HE)染色技术、Hoechst33342-PI荧光染色技术、原位末端标记(TUNEL)法检测猪卵丘细胞凋亡,并对3种定量检测方法进行了比较与分析.试验结果表明:猪COCs在体外成熟过程中存在细胞凋亡的现象,TUNEL法检测卵丘细胞凋亡灵敏度最高,与Hoechst33342-PI荧光染色法、HE染色检测法相关系数分别为0.93、0.85.在本试验中Hoechst33342-PI荧光染色法可代替TUNEL法检测卵丘细胞凋亡.     

生长激素和胰岛素对体外培养猪COCs的影响

研究了生长激素(STH)和胰岛素(Insulin)对体外培养猪COCs卵母细胞成熟及孤雌激活后卵裂、卵丘细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响,结果表明:STH和Insulin对卵母细胞的成熟和激活后卵裂具有双重效应.培养液中添加适当浓度的STH(0.151μg·mL-1)或Insulin(51μg·mL-1)可提高卵母细胞成熟率和卵裂率,与对照组及其他试验组相比差异显著(P<0.05).在猪COCs体外成熟过程中,适当浓度STH和Insulin能抑制卵丘细胞凋亡,抑制Bax在卵丘细胞的表达.     

辽宁绒山羊胚胎冷冻保存方法与技术研究

本研究探讨了不同冷冻方法、不同冷冻液和冷冻前CB处理对辽宁绒山羊胚胎低温保存效果的影响,以筛选适合于辽宁绒山羊胚胎冷冻保存的方法与技术.常规冷冻时以1.5 mol/L EG为保护液的保护效果较好,解冻后胚胎发育率为62.86%,孵化率为54.29%;玻璃化冷冻(细管法和OPS法)以EFS40为保护液可以获得较好的冷冻效果,玻璃化细管法和OPS法解冻后胚胎的发育率分别为65.79%和57.89%;冷冻前CB处理能改善辽宁绒山羊胚胎低温保存的效果.