哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

[目的]介绍哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[方法]从冷冻原理、防冻剂种类、冷冻方法、解冻方法等方面综述了哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[结果]胚胎冷冻保存的原理是阻止冷冻、解冻过程中细胞内形成致死冰晶;防冻剂的种类大致分为低分子量渗透性防冻剂、低分子量非渗透性防冻剂、大分子物质、生物活性物质;胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法、玻璃化冷冻法和快速冷冻法;解冻方法主要介绍了快速解冻。[结论]胚胎冷冻保存技术的应用愈加广泛,将对胚胎生物工程和其他生物技术产生推动作用。     

绵羊胚胎冷冻保存及移植的研究

本研究的目的在于建立绵羊胚胎的慢速冷冻和玻璃化快速冷冻保存方法,为绵羊胚胎移植技术应用于生产提供保证。结果:慢速冷冻保存,解冻后正常胚胎占72％,移植受体的受胚率33％、产羔率66％。玻璃化快速冷冻保存,解冻后正常胚胎率亦达72％,移植受体3只,产羔4只。     

辽宁绒山羊选种方法的研究

对辽宁绒山羊山羊绒品质,包括不同年龄、性别山羊的细度、伸直长度、强度和伸度4个主要指标进行测定,估测绒层厚度、产绒量、体重、细度4个主要经济性状的遗传参数、表型相关和遗传相关。结合育种实践提出在生产中的选择指数。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

辽宁绒山羊皮肤显微结构的研究

应用普通染色连续切片法，对辽宁绒山羊皮肤及部分皮肤衍生物的显微结构进行了观察。结果显示，辽宁绒山羊皮肤显微结构与其他山羊基本一致。辽宁绒山羊皮脂腺在９月和１月较４月和７月份发达     

辽宁绒山羊细管冷冻精液人工授精技术

使用细管冷冻精液人工授精技术,能提高辽宁绒山羊群体的产绒量和绒毛品质,加快高产优质绒山羊的遗传进展。 1.配种母羊 对可繁配种母羊加强饲养管理,使之达到中上等膘情,无疫病和生殖疾患。公、母羊分群饲养,杜绝杂交滥配。繁殖母羊群设专人管理,建立母羊繁殖档案,记录母羊配种、产羔及断奶情况。     

提高牛冷冻胚胎移植妊娠产犊率的研究

分别对牛冷冻胚胎的解冻液、解冻后胚胎的质量评定、解冻后的胚胎处理,及受体牛的同步发情处理方法和移植方法等方面开展研究。结果表明：(1)进口解冻液脱甘油的胚胎复苏率为76％(19／25),优于传统解冻液。(2)解冻后未作任何处理直接移植的妊娠率(68．4％),产犊率(47．37％)最高,切割未作培养的次之(妊娠率37．5％,产犊率25％,流产率33．3％),移植前切割培养的最差(妊娠率、产犊率均为9．09％);(3)受体黄体发育正常、同步发情率高达83％,妊娠率高达62．5％;(4)移植枪加套管受体妊娠率(52．9％)明显比不加套管的高。熟练的操作技术受体妊娠率较高(62．5％)。     

波尔山羊个体精子抗冻性研究

为了加速贵州省地方山羊品种改良,2000年9月试验采用常规的精液冷冻解冻方法,通过鲜精活力、畸形率、冻精活力、解冻后4 h存活指数、顶体完整率、谷草转氨酶(GOT)释放量等指标研究了3只波尔山羊精子的抗冻性,结果3只试验公羊精子抗冻性存在明显差异,968号公羊生存指数显著高于2022和098号(P<0.05),098号公羊谷草转氨酶释放量显著低于2022和968号(P<0.05),但其鲜精品质全部达到常规制作冻精的要求,配种试验,65.77 %(146/222)的受胎率也验证了3只公羊适宜制作冻精。     

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育研究

为寻求适合于山羊卵母细胞孤雌激活的方法,本试验采用离子霉素对体外成熟山羊卵泡卵母细胞进行孤雌激活,同时比较了培养液中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。结果表明:用2.5、5.0和10.0μmol/L离子霉素处理卵母细胞,卵裂率分别为72.3%、75.6%和70.3%,囊胚率分别为40.8%、45.4%和39.4%,均无显著差异(P>0.05)。用5.0、10.0、15.0和20.0μmol/L钙离子载体Ca-A23187处理卵母细胞,卵裂率分别为50.5%、62.5%、60.4%和60.2%,其中5.0μmol/L Ca-A23187处理组的卵裂率极显著低于其他处理组(P<0.01),但各组的囊胚率无显著差异(P<0.05)。用30、70、110和150 mL/L乙醇处理卵母细胞,卵裂率分别为40.6%、63.7%、64.2%和65.3%,其中30 mL/L乙醇组的卵裂率极显著低于其他各组(P<0.01),30和150 mL/L乙醇组的囊胚率极显著低于70和110 mL/L乙醇组(P<0.01)。在培养液与颗粒细胞共同培养条件下,分别添加100 mL/L的发情牛血清(OCS)、胎牛血清(FCS)和...     

实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较

对3日龄小鼠胚胎和5日龄大鼠胚胎进行了玻璃化低温保存和缓慢冷冻保存的比较研究,从经过超数排卵的小鼠和大鼠中收集到了1897个8－16细胞的胚胎,经筛选后将I级和Ⅱ级胚计1738个（91．62%）分别进行两种低温保存试验,并对其中的881个冷冻胚胎分阶段进行复苏,复苏率分别为65．03％（小鼠69．59％,大鼠60．46％）和68．45％（小鼠72．61％,大鼠64．29％）,两者间无显著性差异（P＞0．05）。在复苏在胚胎中,选择其中的488个胚胎进行移植试验,结果,玻璃化冷冻保存胚胎的移植的受孕率为39．47％（89／222）,缓慢冷冻保存胚胎的移植的受孕率为42．56％（115／266）,两种低温保存方法经方差检验也无显著性差异（P＞0．05）。     

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.     

不同化学激活方法对山羊卵母细胞激活效果的研究

激活是体细胞核移植技术的关键步骤。本研究对常用化学激活剂乙醇、钙离子载体A2 3187和离子霉素以及添加 6 二甲基氨基嘌呤 (6 Dimethylaminopurine ,6 DMAP)和放线菌酮 (cycloheximide ,CHX)对山羊卵母细胞的激活效果以及不同卵龄的卵母细胞激活后体外发育效果进行了比较。结果表明 :离子霉素处理组激活率显著高于乙醇和A2 3187处理组 (89.6 %vs 6 3.5 % ,6 8.7% ;P <0 .0 5 ) ;离子霉素 +6 -DMAP处理组激活率显著高于离子霉素 +CHX和离子霉素 +CHX +细胞松弛素D处理组 (90 .1%vs 5 8.9% ,6 3.7% ;P <0 .0 1) ;体外成熟 2 4、2 6、2 8h组桑椹胚率分别为 16 .0 %、2 0 .6 %和 33.3% ,30h组桑椹胚率下降 (13.8% )。以上结果说明 ,在本研究的激活条件下 ,山羊卵母细胞适宜的激活方法为 :成熟起始后 2 8h使用离子霉素和 6 DMAP进行联合激活。     

山羊植入前胚胎发育相关基因的差异表达分析

用mRNA差异显示技术对山羊体内发育的早期2细胞、4细胞、8～16细胞、桑椹胚和囊胚期胚胎和体外培养的成熟卵母细胞、2细胞、4细胞、8～16细胞、桑椹胚和囊胚期胚胎基因的表达进行研究,并选择1条在体内4细胞胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明：表皮生长因子因具有较高的同源性（89％）,该基因通过刺激胚胎细胞分裂增殖影响早期胚胎的生长发育,是山羊早期胚胎发育过程中的重要影响因子。