猪卵母细胞体外成熟及乙醇孤雌激活研究

本试验探讨了不同基础培养液(mTCM-199、NCSU23)和PMSG、HCG浓度、作用时间对猪卵母细胞体外成熟的影响和乙醇及乙醇与各种化学试剂联合处理对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活、孤雌生殖胚胎发育的影响,最终找到了最佳的猪卵母细胞体外成熟培养体系,并确定了乙醇孤雌激活的最佳浓度、作用时间和与不同化学试剂联合处理的最佳组合。试验结果得出:最佳的猪卵母细胞培养体系为:NCSU23+20IU/mlPMSG+20IU/mLHCG+10%PFF,激素作用时间为45h,成熟率可达到70.3+3.9%;乙醇的最佳激活浓度为8%,激活率为29.6+2.5%;乙醇激活的最佳处理时间为10min,激活率为32.6+4.1%;乙醇与CB+CHX联合处理的激活率最高,激活率为60.8+3.2%,卵裂率、3～4细胞率、8细胞及8细胞以上率分别为45.1+3.0%、28.6+3.7%、8.7+1.2%;乙醇与CB+6-DMAP联合处理的激活率为51.7+1.9%,卵裂率、3￣4细胞率、8细胞及8细胞以上率分别为41.7+3.6%、30.3+4.3%、9.9+1.8%,虽然激活率、卵裂率低于乙醇与CB+CHX处理组,但3￣4细胞率、8细胞及8细胞以上率均高于乙醇与CB+CHX处理组(30.3+4.3%vs28.6+3.7%,9.9+1.8%vs8.7+1.2%)。因此,乙醇激活的最佳方法为:8%乙醇处理10min,CB+6-DMAP处理7h。     

畜禽遗传资源和保存的研究进展

我国畜禽遗传资源丰富,特别是地方品种的优异种质特性,是几千年来多样化的自然生态环境所选择的结果,也是劳动人民长期选育的结果,许多优良地方畜禽品种具有适应性强、耐粗饲、繁殖率高和产品优质的特点。畜禽遗传资源保护是关系到养殖业持续发展和生物多样性的重大问题。作为生物多样性重要组成部分的家畜遗传资源库对当今和将来人类的食品和农业生产具有主要的经济、科学及文化价值。通过对动物遗传资源的现状、系统分类、评价方法,动物遗传资源的保存和利用研究进展的论述;并提出了保护好我国动物遗传资源的几点策略,为今后的保种工作提供参考。     

不同供核细胞、处理方法及激活时间对猪核移植重构胚发育的影响

在不同的外界因素下,使用胞质内体细胞核注射的方法,为进一步提高猪体细胞核移植的效率来寻找新途径。利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞经过去核,注核及激活等操作后,研究猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞,血清饥饿处理法及不同的激活时间等因素对猪核移植重构胚体外发育的影响.结果表明,猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚,在卵裂率上无显著性差异。作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养,核移植重构胚的卵裂率无显著性差异。在进行核注射后,使供核细胞与胞质受体作用适当的时间(1～6h)在进行激活,有利于重构胚的发育。提示颗粒细胞和猪胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚以及作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养处理后,这二者对猪核移植重构胚发育的均无明显影响。但是使供核细胞与胞质受体作经过适当的时间(1～6h)的激活,却有利于重构胚的发育。     

应用巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别

为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括.同时指出了各种处理精子方法的优缺点.并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义.     

嵌套式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别体系的建立

应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优化,以准确鉴定牛早期胚胎性别.结果表明,在优化了的PCR反应体系下,中国荷斯坦公牛DNA样品得到178bp和262bp的两个条带,而母牛仅得到262bp的1个条带;静脉血样DNA性别鉴定结果与实际性别相符率为100%,表明本试验建立的体系完全可以用于牛早期的胚胎性别鉴定.     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系优化的研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255 bp的-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255 bp的-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用

介绍了卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用,主要从卵丘细胞与卵母细胞的结构与功能联系,卵丘扩展对卵母细胞体外成熟的影响及卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响三个方面加以阐述。     

大通牦牛生长激素基因和Κ-酪蛋白基因的PCR-RFLP研究

利用PCR-RFLP技术检测了大通牦牛生长激素(growth hormone,GH)基因和Κ-酪蛋白(Κ- casein,Κ-CN)基因部分序列的遗传多态性,结果表明:大通牦牛群体中被检测的两个位点均存在遗传多态 性。GH基因PCR—RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1755和0．8255;(?)-CN基因PCR-RFLP 位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1117和0．8 883。GH基因和(?)-CN基因PCR-RFLP位点的基因 型分布均极显著偏离Hardy—Weinberg平衡定理(P<0．01)。大通牦牛群体内平均基因一致度和基因多样度分 别为0．7561和0．2439。