H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为10²拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。     

在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达

抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法.     

猪附红细胞体生物学特性的研究

采取新鲜血液压片相衬观察和末梢血液涂片染色镜检法,对河南省新乡地区3000头猪附红细胞体病发病情况进行了调查;并且对体温升高、镜检附红细胞体感染强度为 病猪的血液,分别用光学显微镜、扫描电子显微镜进行形态观察和血液生化指标检测.结果表明:猪附红细胞体病的发病率为46.33%,死亡率为13.88%,隐性感染率为55.93%(755/1350).在光学显微镜下观察,红细胞呈现菠萝样;染色血片观察附红体在红细胞表面及边缘呈各种形式排列,可见强折光性发亮的圆形小体;扫描电子显微镜观察.附红体寄生的红细胞凹陷区,有大、小球体,有的小球体与大球体相连.血清胆红素、白蛋白、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶增加,血糖、血清总蛋白、超氧化物歧化酶活性下降.     

猪场哺乳仔猪死亡原因的调查与分析

河南省辉县市冀屯乡东王河养殖场0～27日龄的哺乳仔猪；调查时间为2006年3～4月。     

猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查与防制对策

采用临床调查和实验室检测等方法,对新乡地区猪传染性胸膜肺炎进行了流行病学调查,并提出综防措施。     

鸽毛滴虫形态学观察

鸽毛滴虫是引起鸽毛滴虫病的一种侵害消化道上段的原虫病。通过对鸽毛滴虫进行形态学的初步研究,能够更全面地了解鸽毛滴虫,以便从根本上防治鸽毛滴虫病提供有价值的参考。     

猪羊衣原体病的流行病学调查

近年来,家畜鹦鹉热衣原体感染在我国南方和北方的养殖场中流行比较普遍,引起母畜繁殖障碍等多种疾患,造成其生产性能低下,残次率增加,给我国养殖业带来巨大的损失.     

猪场哺乳仔猪死亡原因的调查与分析

仔猪产后脐带出血没有及时止血，造成死亡：产仔圈消毒不严，仔猪脐带污染，继发其他疾病医治无效；冬天产仔，煤气中毒或火烫伤，烧死烫死仔猪；阉割手术消毒不严，感染破伤风等疾病致死。     

H7亚型禽流感病毒实时荧光RT-LAMP检测方法的建立及应用

根据H7亚型禽流感病毒的血凝素基因中的保守区域设计特异的LAMP引物。10倍倍比稀释试验表明了此方法的高灵敏性,最低可检测到100 fg的RNA。对H1、H3、H4、H5、H6、H9亚型A型流感病毒和NDV进行H7-RT-LAMP检测,并无交叉反应,说明了此方法的高特异性。利用80份临床样品对所建立的H7-RT-LAMP方法进行评价,鉴定结果和病毒分离方法一致,说明此方法的可行性。建立的H7-RT-LAMP方法简单、快速、灵敏、特异,是H7亚型禽流感病毒的一种高效检测方法,适合在基层进行H7亚型禽流感病毒的早期筛检。     

动物附红细胞体病研究进展

根据国内外文献及临床实践,主要从病原学、流行病学、发病机理、临床症状、病理变化、诊断和防治这几个方面对该病的研究现状进行了综述,为今后的研究提供理论依据。