绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究

旨在对绵羊miR-150基因的启动子进行鉴定以及探索生殖激素对miR-150启动子转录调控的影响。本研究利用生物学软件预测雌性绵羊(小尾寒羊)卵巢miR-150启动子区域及繁殖相关转录因子结合位点,构建重组质粒,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-150的启动子活性。通过在无血清培养基内添加FSH、LH和E_2,进行miR-150启动子重组质粒转染并检测miR-150启动子活性。结果,分别利用Promoter 2.0和PROMO软件预测出miR-150启动子区域和转录起始位点,并获得了与繁殖相关转录因子结合位点。所预测的绵羊miR-150启动子片段序列长度为582 bp,且成功构建miR-150启动子质粒,并确定绵羊颗粒细胞的最佳转染效率(脂质体∶质粒DNA=1∶1)和质粒最佳转染比例(50∶1),从而验证了所预测的区域具有启动子活性。此外,FSH、LH和E_2处理组与对照组(无激素组)相比,miR-150启动子的活性均显著下调(P0.05)。结果表明,生殖激素可以通过影响绵羊miR-150启动子活性来调控miR-150基因的表达,为miR-150调控卵泡发育的机制研究提供了新思路。     

拉萨白鸡品种资源研究

通过对拉萨白鸡品种形成与发展、生态条件、外形特征、种群结构、生产性能、饲养管理等研究,结果发现:拉萨白鸡是蛋用品种,形成历史悠久,生产性能较低,蛋品质好,遗传稳定,耐粗饲,适应高寒地区恶劣的自然条件和粗放的饲养管理,这是目前国内外其他鸡品种在高寒恶劣的环境下无法替代的优良种质,属于珍贵的地方品种资源,应该加以很好的保种。     

合作猪和迪庆猪的微卫星遗传多样性分析

采用5个微卫星位点对合作猪和迪庆猪的遗传多样性进行了分析。结果表明,2个猪种在5个微卫星位点的有效等位基因数分别为4.510 4,3.069 6;位点平均杂合度分别为0.771 3,0.602 2;位点平均多态信息含量分别为0.740 2,0.565 6;估计的群体平均近交系数分别为0.115 2,0.091 3。表明合作猪和迪庆猪遗传多样性高,近交程度低。     

吐鲁番黑羊黄体期和卵泡期卵巢microRNA差异表达分析

为研究微小RNA(micro RNA,miRNA)调控吐鲁番黑羊(Ovis aries)发情周期的机制,培育高繁殖力绵羊品种,本研究利用活体手术法分别采集3只吐鲁番黑羊卵泡期和黄体期的一侧卵巢,采用高通量测序获取miRNA数据并进行生物信息学分析,构建和分析吐鲁番黑羊卵巢miRNA在卵泡期和黄体期的表达谱及其差异表达,筛选两时期差异表达miRNA的靶基因进行基因功能注释(Gene Ontology,GO)和通路富集分析(Kyoto Encyclopedia Of Genes and Genomes,KEGG),利用qRT-PCR随机选择3个差异表达的miRNA进行表达水平的验证。获得了吐鲁番黑羊黄体期和卵泡期卵巢表达的已知miRNA 139个,其中126个在两个时期共表达,3个在黄体期特异表达,10个在卵泡期特异表达,并筛选出吐鲁番黑羊两个时期19个差异表达miRNA;GO和KEGG分析结果表明吐鲁番黑羊两个时期差异表达miRNA靶基因分别在抗原处理和提呈、内质网中蛋白质的处理、蛋白酶体、溶酶体和利什曼病5个通路中达到显著富集;qRT-PCR结果显示,选择的3个差异表达miRNA表达水平与测序结果一致。研究获得了吐鲁番黑羊黄体期和卵泡期卵巢组织中miRNA的表达谱,并筛选出差异表达的miRNA及其预测靶基因所参与的信号通路,为该品种后续的卵巢miRNA的研究提供基础资料。结合GO和KEGG分析结果推测差异表达miRNA是通过靶基因参与免疫、蛋白质加工相关通路调节吐鲁番黑羊的繁殖活动。     

合作猪血液蛋白多型性研究

以简单随机抽样法,应用淀粉凝胶电泳技术对55头合作猪13个血液蛋白质座位的多型性进行了分析,结果表明：合作狸在运铁蛋白（Tf)、淀粉酶（Am)、－磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）及碳酸酊酶（Ca)4个座位表现多型,分别受4,4,2,3个共显性等位基因支配,其中Ca^c基因为首次发现,其余9个座位即Cp、Hp、CEs、Pa、EsD、PHI、G6PD、PGM、MDH未发现多型。     

合作猪、迪庆藏猪和成华猪的血清运铁蛋白多型性

采用水平板淀粉凝胶电泳法测定了55头合作猪、52头迪庆藏猪和40头成华猪的皿清运铁蛋白座位的多型性,将所测结果与其它39个亚欧非地方猪群体相比较发现,TfB基因在所有地方猪群体中都存在,TfA基因在中国地方猪群体中常见,TfC基因在亚洲地方猪群体中有从北到南逐渐增多的趋势。