基因枪法和农杆菌介导的Bt抗虫基因转化芥蓝

以芥蓝品种小香菇为试材,分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2转化到芥蓝中,并对两种转化方法进行了优化和比较。结果表明:基因枪法在轰击距离为6cm、轰击次数为1次时转化效率最高,为0.43%;农杆菌介导转化法以带子叶下胚轴为外植体、预培养2d、侵染10min、共培养2d、抑菌培养5d后转入筛选培养基为最佳参数,转化效率为0.37%。经PCR和PCR-Southern鉴定,基因枪法和农杆菌介导转化法均成功将目的基因导入芥蓝基因组中。经抗虫性表型鉴定,T_0代转基因芥蓝植株对甘蓝夜蛾幼虫的抗性高于非转基因植株。     

筛选植物抗氨基酸突变体的研究进展

对筛选植物抗氨基酸及其类似物突变体的研究现状、筛选机制、实验程序、突变体的鉴定、存在问题及展望进行了综述。     

从中国商陆分离的PacPAP基因转化番茄对TMV的抗性研究

以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因.采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50d后统计发病情况.结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因的同源性为99.7%,GenBank登陆号为AY603353;得到PacPAP整合入番茄基因组中的阳性植株11株,检测的4个转基因番茄株系均达到抗病级别,对照为感病.     

应用RAPD标记鉴定结球甘蓝品种

基于DNA水平的RAPD标记已广泛应用于农作物品种鉴定及遗传多样性分析,结球甘蓝是我国大面积栽培的蔬菜种类,品种繁多,至今未见有利用该标记进行大规模品种鉴定及遗传多样性分析的研究.本研究利用RAPD技术,对当前生产上已大面积推广栽培的部分结球甘蓝品种进行鉴定,旨在为这些品种的管理提供科学依据,并在此基础上对其进行遗传多样性分析.     

辣椒抗病分子育种研究进展

辣椒起源于南美洲,16 世纪传入中国。辣椒的营养价值高,在保健、美容、食品、医药、制暴等行业均有重要作用,已成为我国最重要的蔬菜作物之一,栽培面积逐渐增加、目前位居我国蔬菜作物之首。辣椒栽培过程中会遭受各种病害的侵袭,给生产造成重大损失。通过化学防治方法、农业防治措施等可以在一定程度上减轻病虫为害,但选用抗病品种是防治病害最经济有效的措施。随着分子生物学的发展,抗病分子育种与常规育种方法相结合是将来取得突破的发展方向。近年来,辣椒抗病分子育种机理取得了重要成果,尤其是抗病分子机理取得一系列成果。 分子育种主要包括两部分：一是分子标记辅助育种,首先必须找到分子标记,分子标记分为基因标记、构建分离群体进行连锁分析获得的标记以及通过大量材料测序进行关联分析获得的标记;二是基因工程育种,前提是分离获得抗病基因,然后将抗病基因导入到经济性状优良的育种材料中,或者通过基因编辑技术或基因沉默技术使负向调控的基因发生突变,从而提高植株抗病性。该文从辣椒抗病性分子标记及其辅助选择、辣椒抗病分子机理、采用基因工程技术获得抗病辣椒种质（抗病毒病、抗青枯病和抗疫病）等方面进行综合介绍,并对辣椒抗病分子育种的发展趋势和研究重点进行展望。     

转化用抗生素对青花菜离体再生的影响

为确定农杆菌转化青花菜时所用抗生素的适宜浓度,在分化与生根培养基中分别添加不同浓度的卡那霉素(Km)、500 mg/L的羧苄青霉素(Cb)与头孢霉素(Cef),探讨了对青花菜离体再生的影响.结果表明:青花菜外植体对Km比较敏感,表现在分化阶段10 mg/L Km能抑制带柄子叶与下胚轴分化不定芽,在生根阶段15 mg/L Km能完全抑制根的生出.在脱菌抗生素的使用上,分化阶段宜用Cb,并逐步降低浓度,生根阶段宜用低浓度的Cef.     

茄子青枯病抗性相关的E3泛素连接酶基因的筛选及鉴定

茄子在生产中易受青枯病侵袭。为挖掘茄子青枯病抗性基因,前期以茄子高抗青枯病自交系和感病自交系为试材进行转录组分析,获得4个与调控青枯病抗性相关的E3泛素连接酶基因,分别命名为SmSP1、SmSPL2、SmDDA1a1和SmDDA1a2。序列分析发现,4个E3连接酶的结构域在7个物种中较为保守,SmSP1及SmSPL2属RING型E3连接酶,SmDDA1a1和SmDDA1a2属CRL^DDB型E3的底物受体。亚细胞定位表明,除SmDDA1a2定位于细胞核,SmSP1、SmSPL2和SmDDA1a1定位于细胞核及其他细胞部位。4个基因在茄子抗感材料的根、茎及叶中均有表达,叶中最高。青枯菌及外源激素可诱导4个基因的表达,且在抗性材料中的表达量高于感病材料。水杨酸可诱导SmSP1的表达,茉莉酸甲酯可诱导SmSPL2、SmDDA1a1和SmDDA1a2的表达,乙烯利可诱导4个基因的表达。VIGS基因沉默结果显示,在抗性材料中沉默SmSP1和SmDDA1a2后,导致植株青枯病抗性下降,沉默SmSPL2和SmDDA1a1后,对植株青枯菌抗性没有影响。以上结果表明,SmSP1和Sm...     

芥菜的红叶RAPD标记筛选研究

我国西南地区有丰富的芥菜资源,是南方的一种重要蔬菜.经过多年的研究,芥菜的育种方面取得一定的成绩,但是其丰富的资源尚未得到很好的开发利用.常规育种方法,限制了作物上优良基因在远缘作物间的转移.生物工程技术的兴起,为不同物种间的基因转移找到一条可行途径.而分子标记的迅速发展,更为常规育种提供了重要的辅助手段,把作物的优良性状同分子标记选择相结合,可以加速育种进展,对于目标性状的基因定位以及基因克隆均有重要意义.目前研究与目标性状基因相关的分子标记采用近等基因系和集团分离分析     

人工雄性不育基因及恢复基因表达载体的构建

结合Cre／loxp定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了雄性不育基因表达载体pCABARTABn和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pTTABn中的雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、barnase基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp2个同向lox位点之间,再将上述表达盒连同lox位．占、切下插入pCAMBar,获得以除草剂Basta为筛选剂的雄性不育基因表达载体pCABARTABn。PCR方法从溶原菌BM25．8基因组DNA扩增出Cre基因,克隆测序验证无误后插入PBI 525 CaMV 35 S-35S双启动子和Nos终止子之间,再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点,得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。     

青花菜高效离体再生体系的建立

以青花菜为试验材料,探讨了影响离体再生的一些因素,结果表明:取用4～5 d龄无菌苗的带柄子叶和下胚轴,分别培养在MSB+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2 mg/L和MSB+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+AgNO3 2.5 mg/L培养基上,获得了较高的分化率(80%);再生芽插入MS+IBA 0.2 mg/L培养基,生根率达100%.