土壤颉颃芽孢杆菌B-Q2-7的分离筛选及其抑菌作用研究

从杨凌大寨乡采来的土壤中分离到142株芽孢杆菌,经过皿内对峙初筛和无菌发酵滤液复筛得到一株对稻瘟病菌,小麦赤霉病菌,黄瓜枯萎病菌,梨黑星病菌,烟草赤星病菌,番茄灰霉病菌均具有强颉颃作用的芽孢杆菌B-Q2.单孢颉颃性筛选表明B-Q2-7的抑菌活性最强,对稻瘟病菌和番茄灰霉病菌的抑制率分别达到87.4%和90.6%.盆栽实验结果显示B-Q2-7无菌发酵滤液对番茄灰霉病具有良好的预防和治疗作用,10倍液的预防效果和治疗效果分别为89.6%和80.4%.抑菌机理研究表明,B-Q2-7代谢产物对梨黑星和番茄灰霉病菌的孢子萌发具有极强的抑制作用,在稀释10倍时的抑制萌发率分别达到95.9%和100%;显微观察到被B-Q2-7抑制的病原真菌菌丝大部分扭曲、肿大、畸形,出现膨大的泡囊.     

大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

 首次用PCR方法,自大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)的RNA₂(GenBank登录号为:AY789694,未报道)中扩增出外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。结果表明BSMV-CH的CP全长597bp,它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93.1%~93.8%和91.4%~92.4%;与同属的早熟禾半潜病毒(PSLV)和剪秋罗环斑病毒(LRSV)的核苷酸同源性分别为53.0%和41.8%,氨基酸同源性分别为48.1%和40.0%。根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树,分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性。把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上,优化IPTG诱导终浓度后,在37℃ IPTG终浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达。12% SDS-PAGE表明,表达产物大小为48.5kDa,主要以包含体形式存在。对蛋白进行定量后,用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗原,免疫家兔得到抗血清,酶联法(enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)测定的抗血清效价为1/6 400。用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测,结果表明抗血清有很高特异性。     

应用3.85%病毒必克防治番茄病毒病

室内生物学测定表明,3.85%病毒必克可湿性粉剂接种前施药 ,对黄瓜花叶病毒的抑制作用明显高于对照药剂 ,防效达86.7% ,接种后施药抑制效果依然显著 ,达到78.57%。小区药剂对比试验,3.85%病毒必克可湿性粉剂500倍液喷雾 ,对番茄病毒病的防治效果达76.5%。     

西北地区小麦黄矮病流行分析及人工神经网络模型的构建

对西北地区半干旱气候区小麦黄矮病1992—2009年发生、流行情况进行长期监测、分析,选择制约小麦黄矮病发生、流行的23个因素,利用三层人工神经网络可以逼近任意连续函数,对非线性预测系统进行模拟处理的特点,分析所选预测分子,提出一套完整的建立BP人工神经网络模型的方法,并建立陕西省BP神经网络长期预测模型。对1992—2006年数据进行网络训练,利用2007—2009年数据进行测试。结果表明,以发病率为指标,输出结果误差在0.001~0.034之间;以发病级别作为预测结果,模型计算得出的数值与实际病级完全吻合,准确率为100%。说明利用神经网络建立小麦黄矮病预测模型是可行的。     

西北地区小麦黄矮病流行趋势预测模型

为给小麦黄矮病防治适期的确定提供有效手段,利用2001-2010年西北地区小麦黄矮病资料,分析了小麦黄矮病不同年份病害流行动态、品种抗性差异、主麦区流行状况以及病害流行与气象因子的关系。结果表明,不同年份或同一年份不同月份小麦黄矮病发病情况不同,不同品种抗病性存在差异,西北地区主要麦区间该病害流行具有相关性。利用筛选出的8个主要影响因子构建了多因子线性回归预测模型,模型历史拟合率达96.5%,预测效果较好,可用于西北地区小麦黄矮病流行的预测预报。     

大麦条纹花叶病毒诱导大麦cDNA文库的构建

构建病毒诱导的寄主植物cDNA文库是利用酵母双杂交方法筛选与病毒相互作用寄主因子的前提奈件.该文以大麦条纹花叶病毒接种大麦,在ELISA跟踪检测的病毒复制和运动初期,采集大麦叶片,用TRIZOL法提取总RNA,利用SMART原理进行反转录PCR获得dscDNA,Sfi I/Xho I共切后1.1%琼脂糖凝胶检测并分段回收dscDNA,分别与Sfi I/Xho I共切的载体连接后,共同转化X-blue感受态细胞构建文库.文库的容量和质量检测结果表明:文库的容量为1.27×106,插入片段大于500 bp,集中在1.2 kb左右,符合酵母双杂交筛选文库的要求.     

大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定

采集北京田间的大麦感病叶片,室内分离病原,血清学检测能够与BSMV新疆株抗血清反应,室内汁液摩擦接种可侵染大麦、小麦、本明烟和苋色藜,能够种子传毒,电镜观察病毒粒子为杆状,同时,国内首次利用RT-PCR扩增出597bp的BSMV外壳蛋白基因．根据以上结果确定分离到的病毒为大麦条纹花叶病毒,其寄主范围和种子带毒率与新疆株系有差别,可能属于不同株系．     

陕西苹果树腐烂病病原菌的鉴定

分别从陕西各县区采样分离鉴定表明:引起陕西苹果腐烂病的病原菌主要为苹果壳囊孢属(Cytospo-rasp.),其次是梨壳囊孢属(C.carphospermaFr.)。回接及致病性测定表明:两种病原菌分别单独和混合接种后的致病率分别为100%,87%,100%。