对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用

在对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)二温式PCR检测技术前期研究的基础上,将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验,该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)的DNA片段,而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10 pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102~103pg和10~102pg。     

二温式多重RT-PCR快速检测对虾TSV和IHHNV的研究

分别针对桃拉综合征病毒（TSV）基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSVRNA和IHHNVDNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSVRNA和IHHNVDNA,具有高度的特异性和敏感性.临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断.     

多重聚合酶链式反应鉴别新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体研究的概述

新城疫 (ＮＤ)、传染性支气管炎 (ＩＢ)、传染性喉气管炎 (ＩＬＴ)和鸡毒支原体 (ＭＧ)是四种严重危害养鸡业发展的常见呼吸道传染病 ,在世界许多国家广泛流行。这几种鸡呼吸道传染病的流行病学、临床特征和病理变化十分相似。临床上 ,一个鸡群同时感染二种上述呼吸道传染病病原体的现象也常有发生。常规的病原分离鉴定、血清学方法难以对两种上述病原混合感染的鸡呼吸道传染病作出快速鉴别诊断。聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术具有快速、简便、特异及敏感等特点 ,近年来在禽病诊断中已得到了广泛应用。但常规ＰＣＲ技术一次扩增只能诊断一种…     

PCR和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体SPF鸡样品的检测

应用聚合酶链式反应(PCR)和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体(MG)SPF鸡的样品进行检测，在第1～24d，所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出MG，阳性检出率要比传统分离鉴定方法高。在整个试验期不同样品的MG分离、PCR和多重PCR对样品(喉头腭裂粘液、喉气管、肺、气囊膜)的检出率分别为70％、81．3％、76．7％。试验结果表明了PCR和多重PCR对MG的检测不仅特异、敏感、快速，而且操作简便．对阳性样品检测的符合率100％，十分适合在临床上推广应用。     

牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR 快速检测方法的建立

本研究按照牛轮状病毒(BRV)结构蛋白VP6基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了BRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术。对BRV进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,TaqMan实时荧光RT-PCR最低可检测到100个拷贝病毒RNA;与牛病毒性腹泻病毒(BVD)、猪瘟病毒(CSFV)、牛结核杆菌(MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)不发生交叉反应;所制作的标准曲线在10²~10⁹拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.997;与常规的RT-PCR相比,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量BRV进行准确检测,对BRV的诊断有重要意义。     

本地三黄鸡暴发产蛋下降综合症的报告

某鸡场一群２６周龄。未免疫过ＥＤＳ疫苗本地三黄鸡种鸡，发生一种短期内产蛋量突然急剧下降，并伴有大量软壳蛋和畸形蛋为主要特征的疾病，经临床观察和实验室检查，综合判定该鸡群流行的疫病为产蛋下降综合症。     

鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT PCR检测方法的建立

为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR方法。使用该方法对同一样品中的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均得到与试验设计相符的202bp(鸭Ⅰ型肝炎病毒),351bp(鸭圆环病毒)和474bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对小鸭温病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测到1pg的鸭Ⅰ型肝炎病毒RNA、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA。建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒感染的检测。     

贝类折光马尔太虫荧光定量PCR检测方法的建立(英文)

[目的]建立贝类折光马尔太虫荧光定量PCR检测方法。[方法]根据基因库中折光马尔太虫的基因保守序列,设计合成了一对引物和一条TaqMan探针,建立检测折光马尔太虫的荧光定量PCR方法,将建立的荧光定量PCR检测方法与常规PCR检测对比。[结果]所建立的荧光定量PCR方法灵敏度可达40个拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍,对派琴虫、单孢子虫、嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、河弧菌和拟态弧菌等病原体的检测结果为阴性。[结论]研究建立的折光马尔太虫荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床上折光马尔太虫感染的检测。