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【目的】 探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S蛋白的结构和功能,为建立PEDV感染的诊断方法和疫苗开发提供理论依据。【方法】 以PEDV经典CV777株为模板,通过PCR扩增获得S、S1基因片段;PCR扩增产物分别克隆pET-30a (+)原核表达载体和pFLAG-CMV-3真核表达载体,构建原核表达质粒pET-30a-PEDV-S和真核表达质粒pFLAG-CMV-3-PEDV-S1;将pET-30a-PEDV-S转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达PEDV-S重组蛋白,通过变性、复性、浓缩纯化重组蛋白并进行Western blotting检测;将PEDV-S重组蛋白免疫C57BL小鼠制备多克隆抗体,获得的多克隆抗体经间接免疫荧光试验(IFA)检测特异性,通过间接ELISA法检测多克隆抗体效价;将pFLAG-CMV-3-PEDV-S1转染至HEK293T细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,经IFA测定PEDV-S1蛋白的抗原性和多克隆抗体的反应性。【结果】 成功克隆出PEDV S和S1基因,构建了可表达PEDV-S重组蛋白的原核表达质粒和在HEK293T细胞中高效表达S1蛋白的真核表达质粒;PEDV-S重组蛋白在IPTG为0.5 mmol/L、16 ℃诱导8 h条件下可获得最高表达量,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,PEDV-S重组蛋白成功表达;ELISA检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达1:3 280 500;IFA结果显示,多克隆抗体有良好的特异性,可特异性识别PEDV-S和PEDV-S1蛋白。【结论】 本研究获得了PEDV-S重组蛋白,并成功表达S1蛋白,制备出PEDV-S蛋白多克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础。 相似文献
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鞍山市是‘南果梨’的主产区,近几年产量不断提高,恒温冷库的贮量也有了很大的提高.2012年11月1日,鞍山市有关技术人员相继反映,‘南果梨’在冷藏库中普遍发生果实提前后熟软化(当地果农称"来梨"),严重者果肉、果心褐变,失去商品价值.‘南果梨’果实一旦开始软化,就必须结束贮藏,尽快销售,否则会很快软烂.采收时果园收购价2.80元/kg,"来梨"的果销售价仅1.20元/kg,果农、贮户经济损失巨大.
为了尽可能减少果农、贮户的经济损失,同时找出导致‘南果梨’后熟提前的原因,2012年11月3-4日国家梨产业技术体系贮藏保鲜岗位专家王文辉研究员带领团队成员佟伟、杜艳民到‘南果梨’主产区鞍山市千山区和海城市进行调研.此次调研重点调查了唐家房镇摩云山村,大屯镇东白石村、南白石村,马风镇祝家屯村‘南果梨’合作社等,调查对象既有规模相对较小的单独贮户,也有规模较大的农民集体合作社. 相似文献
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不同低温贮藏对砀山酥梨货架期组织褐变和品质的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
以山西太谷和临猗地区的砀山酥梨果实为材料,研究了–1、0、1.5和5 ℃低温对贮藏后20 ℃货架期砀山酥梨虎皮病、果心褐变以及果实品质的影响。结果表明:砀山酥梨虎皮病主要出现在低温贮藏后期(200 d以后)出库的货架期果实上,而且贮藏温度越低,货架期间虎皮病越严重。在–1和5 ℃贮藏条件下砀山酥梨的果心褐变指数明显高于0和1.5 ℃。0和1.5 ℃能较好保持果实的硬度和可溶性固形物含量,保持果实较好的口感和风味;5 ℃果实硬度最低,腐烂率最高;–1 ℃虽然可以降低果实的腐烂率,但贮藏后期果实硬度和可溶性固形物含量下降,果实风味异常。山西太谷和临猗两个地区生产的砀山酥梨在不同低温条件下品质变化规律基本一致。研究结果表明,酥梨中长期贮藏温度以0 ~ 1.5 ℃为宜,中短期贮藏(120 d之内)可采用1.5 ~ 5 ℃。 相似文献
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N、P、K对高淀粉玉米产量及营养品质的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
采用二次正交旋转组合设计,在N、P2O5、K2O施用量分别为102~276 kg/hm2、13.8~138 kg/hm2、8.6~138 kg/hm2条件下,探讨N、P、K对高淀粉玉米华单208产量和营养品质的影响。结果表明,对玉米产量,N的影响为开口向下的二次曲线,K为正线性关系,K与N存在负向互作;对粗淀粉含量,N的影响为开口向上的二次曲线,存在最低含量的施N量,P、K则为负线性关系,P与K存在负向互作;对粗脂肪含量,N、K的影响均为开口向下的二次曲线,P则为负线性关系,P与K存在正向互作。 相似文献
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高纯度蛋黄卵磷脂的提取工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]探索蛋黄卵磷脂的最佳提取工艺。[方法]以鸡蛋黄为原料,采用无机盐复合沉淀法精制卵磷脂,通过单因素试验与正交试验,优化卵磷脂的最佳提取工艺。[结果]卵磷脂的最佳提取工艺为:蛋白酶添加量0.06%,乙醇浓度90%,提取温度25℃,金属离子浓度40%。[结论]无机盐复合沉淀法是一种高效、经济的提取方法。 相似文献
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高O_2和高CO_2浓度以及近冰温贮藏对樱桃保鲜效果的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了高O2和高CO2气调以及近冰温贮藏对拉宾斯、8-102和先锋等品种果实的贮藏保鲜效果。结果表明,拉宾斯和8-102果实不适合高O2(80%O2和100%O2)气调贮藏,高O2处理加重樱桃果实贮藏期间的腐烂和褐变;3%O2+5%CO2对拉宾斯和8-102果实的腐烂和褐变的抑制效果好于3%O2+10%CO2和3%O2+15%CO2。先锋和雷尼的贮藏温度为-1~1℃,美红、萨米托和拉宾斯的贮藏温度为-1~2℃,在此温度范围内,美红的贮藏低于30 d,先锋、雷尼、萨米托和拉宾斯贮藏50 d,果实风味保持较好,腐烂率在5%以下。 相似文献
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以寒富苹果为试材.研究不同采收成熟度及1-MCP处理对20℃货架和0℃冷藏期间寒富苹果生理与品质的影响。结果表明,在辽西地区贮藏的寒富苹果适宜采收期在10月10~20日,成熟度指标参考值如下:果实生长发育期为165~170d,果实硬度〉6.07kg/cm^2,可溶性固形物含量(SSC)>12.4%,可滴定酸(TA)含量〉0.41%;1-MCP处理可以明显延缓寒富苹果的衰老进程,建议使用浓度为1.0μL/L。 相似文献