罗非鱼循环水养殖系统中一株肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其脱氮性能研究

实验从山东德州市一罗非鱼(Oreochromis niloticus)养殖场循环水养殖系统的脱氮池中分离到一株具有高效脱氮特性的菌株(编号DZYC02),分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、丁二酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠为碳源,研究了碳源种类对菌株DZYC02脱氨氮效果的影响;同时以蔗糖为碳源、NH4Cl为氮源,研究了不同碳氮比、初始pH及盐度对该菌株脱氮效果的影响。结果显示:菌株DZYC02在以柠檬酸钠为碳源、C∶N≥15、pH 5~7、盐度0~15的条件下具有良好的脱氮效果,24 h内对浓度为20 mg/L的NH+4的去除率达100%,48 h内对浓度为20 mg/L的NO-2去除率高达100%;将该菌采用浸泡方式感染斑马鱼(Danio rerio)进行生物安全试验,结果显示菌株DZYC02对斑马鱼表现出较好的安全特性。分别用Biolog细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行鉴定,结果显示菌株DZYC02为一株肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)。     

江苏高邮罗氏沼虾池塘养殖可培养微生物组成调查

为了探明罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)池塘养殖环境中重要微生物的组成, 以提升健康养殖管理技术, 分别于 2019 年 7 月、8 月和 10 月, 在江苏高邮市罗氏沼虾主养区开展了罗氏沼虾池塘养殖系统可培养环境微生物的组成调查。采用 LB 培养基分离纯化了罗氏沼虾肝胰腺、肠道、鳃及养殖水体中可培养的细菌, 利用细菌 16S rRNA 基因分子鉴定技术对分离菌株进行初步鉴定; 采用高通量测序技术分析了“铁壳”虾(养殖期生长缓慢)及铜绿微囊藻暴发池塘水环境微生物群落组成。以达卡气单胞菌(Aeromonas dhakensis)为受试病原菌, 分析了池塘养殖系统中潜在病原拮抗菌的种类及效果。3 次调查共分离可培养细菌 605 株, 成功鉴定 601 株, 分别属于 37 个属 119 种, 其中罗氏沼虾体内分离到菌株 23 属 76 种, 养殖水体中分离到 28 属 81 种。确定了池塘养殖系统中存在气单胞菌(Aeromonas spp.)、肠杆菌(Enterobacter spp.)、乳球菌(Lactococcus spp.)、弧菌(Vibrio spp.)等属的潜在病原菌。发生“铁壳”虾症的虾池优势环境微生物种类组成及占比与健康虾池相近, 但微小杆菌属(Exiguobacterium)与不动杆菌属(Acinetobacter)细菌占比高于健康虾池。铜绿微囊藻暴发影响环境微生物的组成结构, 嗜水气单胞菌属细菌占比增大。从池塘养殖系统筛选到甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)、贝莱斯芽孢杆菌 (B. velezensis)、解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens)等潜在益生菌对气单胞菌具有较强拮抗作用。调查结果可为掌握罗氏沼虾池塘养殖系统细菌性病原组成及建立防控技术提供理论依据。     

浅谈公路建设过程中环境保护与植物的关系

近几年国家大力发展公路交通事业,公路建设的步伐越来越大。总里程不断增长,汽车保有量持续增加,公路在国民经济综合运输体系中的位置愈来愈重要。伴随着公路的高速发展,公路污染、公路对周边环境影响等问题也大量凸现出来,但是随着人民生活质量的提高,对环境的要求也越来越高。这个矛盾日益凸显出来。公路建设如何实现与自然环境的和谐统一,减少或杜绝公路环境污染、恢复路域生态损失是摆在我们面前的一个重要课题。高速公路绿化带的设置是一种解决环境问题的最直接办法之一。     

植物动力2003对香菇增产效果的研究

植物动力２００３（简称“２００３”）是一种植物营养液，以叶面喷施的形式广泛应用于农作物、蔬菜、果树等，它具有促进作物新陈代谢、补充多种微量元素、增强作物抗病性、延缀作物衰老、提高作物产量之功效。然而，“２００３”在香菇菠培中的应用未见报道，对此，笔者在沈田市大兴、正良进行了大棚袋栽香菇喷施“２００３”试验，结果表明它对香菇增产效果较理想。现报告如下：１ 材料与方法１．１供试菌株 香菇Ｃｒ－０４，引自辽宁省农科院。１．２ 培养料配方 阔叶木屑７８％，皮２０％，石膏１％，糖１％，含水量６０％－６５％。１…     

省会茶艺馆应向品牌化发展

在茶文化热不断升温的大气候下 ,河北省会各类茶艺馆像雨后春笋越开越多。它不仅为工作繁忙、精神紧张的快节奏的都市人提供了一个休闲、品茗、商洽的幽雅场所 ,也为我国传统的茶文化的继承和发扬 ,为省会文明建设增添了一道靓丽的文化风景。然而从省会茶艺馆业的总体经营情况看也不尽相同。从市场竞争的规律来看 ,它同其他行业一样 ,同样存在优胜劣汰的危机。茶艺馆要在激烈的市场竞争中取胜 ,在经营策略上就必须树立品牌意识 ,体现自己的经营个性和特色。首先要营造闲逸、舒适的品茗环境。品茶历来讲究环境 ,或青山翠竹、小桥流水 ,或琴棋…     

非洲菊无土栽培新方式技术研究

以非洲菊为试材，研究出适合的继代培养基为MS 6．BA 0．8(mg／L，单位下同) NAA0．3；适合的生根培养基为1／2MS IBA1．0。以无土栽培方式与传统有土栽培方式比较，在品质、产量、产值等方面有明显的优势。是一项很有发展前景的新型栽培方式。     

抗弧菌杀鱼假交替单胞菌2515的潜在毒性及热处理脱毒后抗菌效果

为评估一株具有弧菌拮抗功能的杀鱼假交替单胞菌2515 Pseudoalteromonas piscicida 2515 (以下简称"菌株2515" ) 对海水养殖动物的毒性, 并确定一种有效的热处理脱毒方法, 在中国明对虾Fenneropenaeus chinensis育苗水体中分别添加浓度为105、 106、 107、 108 CFU/mL的菌株2515, 测试其对中国明对虾受精卵孵化及幼体发育的影响.结果表明: 水体中添加浓度高于105 CFU/mL的菌株2515后, 显著降低了无节幼体变态发育至蚤状幼体的成活率 (P<0. 05); 分别应用血平板及显微观察法测试菌株2515对羊、鱼及对虾血细胞的溶血活性, 结果显示, 该菌对羊及鱼红细胞均具溶血活性, 而对凡纳滨对虾 Litopenaeus van-namei血细胞无溶血活性; 设置不同温度 (40、 45、 50、 55、 60、 65、 75℃) 热处理菌株2515及其破碎液,结果显示, 55 ℃ 1 h能够灭活该菌, 且失去对鱼类红细胞的溶血活性, 而抑菌物质活性可提高55. 8%.研究表明, 菌株2515对鱼虾具有潜在毒性, 选择适当热处理, 既能灭活溶血活性还可提高抗菌活性.     

同步检测海水养殖动物5种病原菌的扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)方法的建立与应用

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)是我国海水养殖动物5种重要的病原菌.本研究在分析了其致病因子基因的基础上,依据扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)的原理,设计了5套特异性的套式PCR引物,并在各内引物的5'端分别加上能被一对通用引物识别的标签序列;通过对套式PCR中影响扩增结果的引物混合物浓度、退火温度、Mg2+浓度、dNTPs浓度以及Taq DNA聚合酶浓度等5个反应参数的调整和优化,最终建立了一种能同步检测海水养殖动物5种常见病原菌的Arm-PCR方法.优化后的Arm-PCR方法第一步PCR反应体系为:10×PCR Buffer 5 μL(含20 mmol/L的Mg2+),dNTP(各2.5mmol/L)5μL,T的酶(2.5 U/μL)0.6 μL,10×Primer Mix(2 μmol/L)5 μL,DNA模板各1μL,灭菌双蒸馏水补足至50 μL,反应的退火温度为55℃.实验结果表明:对鳗弧菌、哈维氏弧菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌和副溶血弧菌这5种病原菌,使用该方法可以在1支反应管内快速、同步进行检测,得到大小分别为144、190、266、315和371 bp的特异性产物,其检出灵敏度分别为1.745、1.847、16.000、28.126和369.900 pg细菌基因组DNA;该方法特异性强,与大肠杆菌(Escherichia coli)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等其他细菌以及半滑舌鳎基因组DNA不产生交叉反应.2012年,应用该Arm-PCR方法对分离自病鱼的24个优势菌株进行了检测,确定出5株迟缓爱德华氏菌、3株嗜水气单胞菌、2株哈维氏弧菌及2株副溶血弧菌,证实该方法具有良好的可靠性和实用性.该方法不仅适用于海水养殖动物中致病性鳗弧菌、哈维氏弧菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、副溶血弧菌的快速、同步检测和病原流行情况调查,也为进一步开发相应的基因芯片检测方法打下了基础.     

单克隆抗体酶联免疫技术检测对虾皮下及造血组织坏死病的病原及其传播途径

用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ技术对１９９４年５月～７月自山东和辽宁采集的虾池和海区材料，包括对虾、浮游生物、小型甲壳类生物、鱼类、底泥及饲料等共１９２个样品进行了对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的检测。结果表明，对虾中的ＨＨＮＢＶ阳性与虾池发病情况基本相符，用单抗ＥＬＩＳＡ方法可提前２０～４０ｄ对虾池的发病可能性作出预报；桡足类浮游生物的带毒率高于对虾，且其阳性的出现早于对虾，沿岸海区的桡足类浮游生物有较高的阳性率，它可能是对虾暴发性流行病的主要病原携带者；部分地区的卤虫也带有ＨＨＮＢＶ，同时还从糠虾等小型甲壳类生物中检出了病原。     

一种微生物絮团的生化分析及其对凡纳滨对虾免疫力的影响

利用红糖与尿素为碳氮源在自然海水中培养微生物絮团,获得絮团产物,其离心后进行初步的生化分析表明,絮团产物上清液中微生物胞外产物重均分子量为213 281 u.絮团沉淀物中多糖含量占29.6％,氨基酸含量占12.6％.将絮团产物按0、0.02％、0.1％、0.5％、2.5％的比例添加至低蛋白饵料中投喂凡纳滨对虾,14 d后分别测定实验对虾血清溶菌活力、抗菌活力和酚氧化酶活力,结果显示,在饵料中添加微生物絮团浓度为2.5％的对虾血清中抗菌与溶菌活力最高,添加微生物絮团浓度为0.5％与2.5％的对虾血清中酚氧化酶活力较低蛋白饵料对照组显著提高.用哈维氏弧菌感染实验对虾后,饵料中添加0.1％微生物絮团产物组对虾的死亡率最低.综合分析认为,凡纳滨对虾摄食微生物絮团后,能够显著提高对虾的非特异免疫力,抗微生物感染的能力得到增强.