一株鸡源H6N1亚型禽流感病毒全基因的分子特征

2008年国家禽流感参考实验室在我国禽流感流行病学调查期间分离到1株鸡源H6N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/ZheJiang/80/2008(H6N1)(简称为CK/ZJ/80/08),为了弄清该病毒的分子特征,我们对其8个基因片段分别进行扩增和序列测定,对每个基因进行BLAST分析,找出同源性最高的毒株。利用DNAStar中的Megalign功能进行进化分析。结果表明CK/ZJ/80/08的HA裂解位点附近的氨基酸序列为QIETR↓GLF,推测可能为一株低致病力AIV。其HA基因与日本北海道的A/duck/Hokkaido/228/2003(H6N8)和黑龙江的A/mallard/Heilongjiang/131/2006(H6N2)以及香港早期分离株A/chicken/HongKong/17/77(H6N1)等处于同一分支;NA基因在颈部没有缺失,与A/duck/Tsukuba/718/2005(H1N1)、A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)等处于同一分支;M基因与A/duck/Hokkaido/W90/2007(H10N7)高度同源(同源性为99%);NS基因与A/duck/Denmark/65047/04(H5N2)和A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)处于同一分支。NP、PA、PB1、PB2分别与贵州和江西分离的H5N2亚型AIV的相应基因关系密切,同源性分别为98%、97%、97%、97%。由此推测CK/ZJ/80/08可能是由H6N2、H1N1、H10N7、H5N2等多个亚型病毒重组而成。     

甲·咪·福防治水稻立枯病的配方筛选

采用菌丝生长速率法测定了甲霜灵、咪鲜胺和福美双3种单剂及5种混配制剂对水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的室内联合毒力。试验结果表明:3种单剂中咪鲜胺对水稻立枯丝核菌和禾谷镰刀菌的抑制作用最明显,有效中浓度(EC50)分别为0.61μg/m L和0.91μg/m L。5种配比中H1[V(甲霜灵)∶V(咪鲜胺)∶V(福美双)=2∶1∶5]、H2[V(甲霜灵)∶V(咪鲜胺)∶V(福美双)=2.5∶1.0∶4.5]对水稻立枯丝核菌和禾谷镰刀菌的共毒系数分别为174.2,201.83和483.75,442.95,增效作用明显,可作为田间试验的优选配方。     

胡瓜新小绥螨对B型烟粉虱的控制能力

为明确胡瓜新小绥螨Neoseiulus cucumeris Oudermans对烟粉虱Bemisia tabaci Gennadius的控害潜能，在（26±1）℃、相对湿度65%±5%、光周期16L：8D条件下，研究了各螨态胡瓜新小绥螨对不同发育阶段烟粉虱的捕食作用。结果表明，胡瓜新小绥螨幼螨期较短，不取食烟粉虱，其他不同螨态的胡瓜新小绥螨可捕食除4龄若虫和成虫以外的其他各虫态的烟粉虱，捕食功能反应符合HollingⅡ型；胡瓜新小绥螨雌成螨对烟粉虱卵的日捕食量最大（8.5粒/雌），对烟粉虱3龄若虫的日捕食量最小（2.1头/雌）；雌成螨对烟粉虱卵具有较高的瞬间攻击率（0.038）和寻找效应（0.025）。研究表明，胡瓜新小绥螨对烟粉虱卵及低龄若虫的捕食能力较强，是烟粉虱发生初期的有效天敌。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗对H5N1亚型7.2分支病毒的攻毒保护性研究

为有效防控2006年以来出现的H5亚型7.2分支禽流感病毒(AIV)引起的免疫鸡群高致病性禽流感(HPAI)的流行,我们构建了重组AIV Re-4疫苗株,研制出含有重组AIV Re-4株的H5亚型二价系列灭活疫苗,并在我国北方地区使用,有效地控制了其流行。2012年我国北方地区再次出现7.2分支病毒引起的HPAI疫情。为评估现有H5亚型二价系列灭活疫苗对该分支病毒的免疫保护效力,本研究首先通过SPF鸡进行免疫攻毒试验评估。结果表明,分别以每羽份(0.3 mL/只)的Re-5+Re-4株和Re-6+Re-4株重组AIV H5二价油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫3周后针对重组AIV Re-4株的HI抗体均达到8 log2以上;经鼻腔接种7.2分支AIV CK/NX/2/12株(100 LD50)攻毒后,免疫鸡均获得完全保护,即无任何临床症状和排毒现象,而对照组SPF鸡全部发病死亡。此外,以哈尔滨当地养殖场中免疫H5亚型AIV灭活疫苗的48只商品蛋鸡进行攻毒试验,结果显示,商品蛋鸡血清中针对重组AIV Re-4株HI抗体平均滴度为8.3 log2,采用相同方式攻毒后也获得完全保护。本研究结果表明,Re-5+Re-4株和Re-6+Re-4株重组AIV H5二价灭活疫苗均能够对H5亚型7.2分支病毒的攻击提供良好的免疫保护效果。     

禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测，结果显示，病毒尿囊液的最低检出稀释度为1：10^4；阳性棉拭子的最低检出稀释度为1：2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，二者符合率为100％，但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现，而其他14种禽病病原均无目的条带出现，表明该方法的特异性好。     

A/African Startling/England-Q/983/79(H7N1)与我国H7N2亚型禽流感病毒分离株的比较

本研究通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStartling/Eng-land-Q/983/79(A.S/E.Q)(H7N1)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因,将其分别克隆到PMD18-T载体后进行序列测定;并将克隆到的8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析。结果表明所克窿到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架;HA、NA基因的序列分析表明A.S/E.Q符合低致病力禽流感病毒的特征;与我国H7N2亚型AIV分离株A/chicken/Hebei/1/02的序列比较发现,A/chicken/Hebei/1/02的HA、M、NP、PB1、PA基因与A.S/E.Q同源性最高,说明我国北部分离的AIV起源于A.S/E.Q。     

SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒

为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明:此次建立的检测AIV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160)。对其他病毒(NDVI、BDVI、BV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速。     

维生素E对奶牛抗氧化功能的影响

用自制的维生素Ｅ（ＶＥ）胶囊饲喟亚临床维生素Ｅ缺乏的奶牛, ０ｄ,３０ｄ,６０ｄ对血清脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和总抗氧化能力为Ｔ－ＡＯＣ）进行测定。结果发现：第３０天,第６０天血清ＳＯＤ、Ｔ－ＡＯＣ活性均高于对照组;血清ＭＤＡ含量明显低于对照组。这就提示维生素Ｅ具有很强的抗氧化能力。     

1株野鸭源H6N2亚型AIV对SPF鸭的致病性

本研究选取2周龄SPF鸭（绍兴麻鸭）自天然孔感染1株野鸭源H6N2亚型LPAIV,评价其对幼龄鸭的致病性。结果显示,试验感染鸭临床症状较轻微,病毒在鸭消化道复制能力较呼吸道内更强,且具有水平传播的能力。仅能在盲肠扁桃体和法氏囊2个组织器官中检测到病毒,但可对法氏囊等多个组织器官造成不同程度的损伤。此外感染鸭可产生HI抗体,并在第21天达到高峰。结果表明,该株H6N2亚型LPAIV对幼龄鸭的致病力较低,在AIV病毒传播中幼龄鸭起到了一定作用,为研究H6N2亚型LPAIV的致病机制及AIV发病机理提供了理论数据。     

农用三轮车的选购要点和寿短原因

一、农用三轮车的选购要点（１）检查随车备件、附件、工具是否齐全，使用说明书、产品合格证等资料是否完整清晰。（２）检查整车各零部件是否齐全，有无断裂、损坏或丢失。特别是部件紧固、联接用的螺栓、螺母、照明设备等。注意整车外观质量。（３）检查焊接件的焊缝有无开焊、漏焊或烧穿等缺陷。铸件有无裂纹。（４）检查有无漏油、漏水情况。首先查看停车处有无油污、水迹，然后检查机器上有无渗漏痕迹。（５）检查轮胎是否漏气和硬性损伤。（６）检查柴油机运转情况。柴油机起动应顺利，起动后声音应柔和均匀，运转平稳，无杂间，排烟…