根癌农杆菌介导转化获得耐逆性增强的高羊茅转基因植株

 为改良草坪型高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）的耐逆性，以成熟种子来源的胚性愈伤组织为受体材料，通过农杆菌介导法将拟南芥（Arabidopsis thaliana）耐逆相关CBF1基因导入4个供试品种的基因组，经GUS染色、PCR检测和Southern杂交分析验证，获得了112株转基因植株，转化频率为0.92% ~2.87%，不同品种间存在差异。试验表明，在高盐与高渗胁迫下，转基因植株具有显著生长优势，存活率极显著高于非转化对照植株，经低温、高温、干旱和高盐等逆境胁迫处理后的叶片相对电导率平均较对照植株低25% ~ 30%，证明转基因植株的耐逆性有所增强。考察发现，非胁迫条件下CBF1基因的组成型超表达使转基因植株的生长受到抑制。     

黄色诱虫板在温室和露地诱虫谱的比较研究

对黄色诱虫板在温室茄子和露地四季豆上的诱虫谱进行了研究.结果表明,黄色诱虫板可诱集同翅目的粉虱、蚜虫、叶蝉、飞虱等,双翅目的斑潜蝇、各种实蝇、果蝇、寄生蝇、各种瘿蚊、摇蚊等,缨翅目的蓟马,半翅目的各种蝽类,鞘翅目的各种小型甲虫,膜翅目的各种蜂类,鳞翅目的各种小型蛾类(小菜蛾)、蝶类(菜粉蝶)等7个目几十种小型害虫的成虫.在温室设施内的黄板诱虫谱,同翅目害虫占87.97%,双翅目害虫占9.19%,缨翅目害虫占2.39%,其它害虫(包括半翅目、鞘翅目、膜翅目)占0.45%.在露地的黄板诱虫谱,同翅目害虫占28.96%,双翅目害虫占26.86%,缨翅目害虫占42.53%,其它目害虫占1.65%.黄色诱虫板诱虫谱广,对目标害虫诱杀作用十分明显,在露地对粉虱、斑潜蝇、蓟马、蚜虫的诱集量占总诱集量的83.75%,而温室则高达97.87%,温室内诱虫效果好于露地.     

不同TAIL-PCR通用引物在转基因大豆、水稻、油菜侧翼序列分离中的应用评价

为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩增效果存在显著差异,同一简并引物在不同转基因物种的扩增效果显著不同.AD1引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好,AD2引物在转基因水稻、油菜和转基因大豆中扩增效果均较好,AD3引物在转基因水稻中扩增出1个株系,在转基因油菜中扩增出1个株系,但AD3引物与pFGC5941 T-DNA RB上游有匹配,不适用于以pFGC5941为载体的转基因材料分析.AD4和AD5 2个引物在3个转基因物种的扩增均较差.对AD1和AD2两个引物的TAIL-PCR扩增产物进行测序,结果表明,扩增产物均对应转基因材料的侧翼序列.研究表明,不同通用引物在不同转基因事件中侧翼序列的分离效果差异较大,通用引物AD1和AD2TAIL-PCR成功率最高.不同通用引物的应用效果不仅与不同物种有关,也与外源基因的插入位点有关,而且还与载体序列匹配程度相关.为提高TAIL-PCR中T-DNA插入位点侧翼序列分离成功率,建议同时采用多个通用引物平行扩增.     

转基因植物及其食品安全性评估方法

转基因产业的迅猛发展使转基因食品从实验室走向餐桌,转基因食品的安全性已为全世界所关注,它涉及到贸易壁垒和人体健康。文章从食品安全的内涵和外延出发,在实质等同性原则的基础上,从外源基因、遗传修饰、非预期效应等方面论述了转基因植物及其食品的安全性评估方法,以便为我国的转基因植物安全性评估和政府监管提供参考。     

热加工过程对转基因水稻检测的影响

热加工会导致食品中DNA的降解和破坏,为研究热加工过程对转基因水稻检测的影响,试验采用水煮、高温灭活、高温烘干和微波4种外源模拟热加工的方法处理目前我国3种转基因水稻（KF6,KMD1和TT51-1）。并按照国家标准对相应的参数进行检测,内源基因SPS,CaMV35S启动子,NOS终止子和抗虫基因Bt,4种参数的PCR扩增结果显示,热加工过程无论对内源基因和外源插入基因的检测都有影响,表明现行的标准对转基因水稻加工品的检测存在局限,同时我们重新设计了针对抗虫基因Bt 的引物用于检测热加工处理的样品,扩增结果优于标准引物。     

转Cry1Ab水稻纯合体快速准确的PCR鉴定方法

转Cry1Ab基因水稻Bt22为一种新型的转基因抗虫水稻,本研究介绍了一种筛选纯合转基因植株Bt22的PCR方法。根据外源序列在Bt22中插入位点的两侧旁邻序列设计引物,建立了转基因抗虫水稻Bt22品系特异的定性PCR检测方法,该方法灵敏度可达0.01 ng,在此基础上组合各引物建立了筛选转基因水稻Bt22纯合体的多重PCR方法,结果表明该方法简单高效,便于操作。     

几种动物生鲜肌肉组织样品DNA提取方法的比较研究

比较不同提取原理的试剂盒对动物生鲜肌肉组织DNA提取效果,为日常肉制品掺假检测与监测选择合适的DNA提取方法提供参考。以生鲜牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉为试验材料,采用改良CTAB法、蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法等原理的8种不同方法来提取组织样品DNA,并对提取DNA的完整性、浓度、纯度、试验耗时和后续实时荧光定量PCR检测等指标进行评价。结果表明,8种提取方法均可用于常见动物源性肌肉DNA的提取。与改良CTAB法相比,原理为蛋白酶K法、SDS法和快速萃取法的试剂盒避免了有机试剂的使用,且操作耗时短。实际操作中,可优先选择基于蛋白酶K法和SDS法的试剂盒进行DNA提取,其提取的DNA纯度和总量高,盐残留少,对实时荧光定量PCR的抑制少,满足肉制品掺假检测与监测的核酸提取需求。     

欧盟转基因食品溯源管理体系

食品的可追溯性是转基因食品安全的关注重点之一,欧盟通过法规（EC）NO 1830/2003建立了转基因食品可追溯性管理框架,并通过法规（EC）1829/2003来规范转基因食品的授权和投放市场后的监督、以及转基因食品的标签管理;通过唯一标识系统法规（EC） 65/2004实现转基因食品的溯源管理,整个溯源体系体现了欧盟在食品安全管理中“从农场到餐桌”的管理理念。文章系统介绍了欧盟转基因食品溯源管理体系,为我国转基因食品的溯源及其管理提供参考。     

无土栽培系统长瓜疫病病原菌的鉴定

于1995－2000年在浙江省的无土栽培系统发病的长瓜上，分离到92个疫病菌分离物，取典型的4个分离物作为供试菌株，观察无土栽培系统长瓜疫病的症状，及供试菌株的病原菌孢子囊、有性器官及其菌落形态等特征，测定不同温度下的生长特性和寄生范围。结果表明，孢囊梗为不规则分枝，孢子囊顶生，近球形、椭圆形、长椭圆形、卵形、肾形或不规则形，有明显的乳突，有的孢子囊则不止一个乳突，孢子囊成熟后易脱落，并带有长的孢囊柄，在水中极易释放出游动孢子，游动孢子肾形。异宗配合，藏卵器球形，直径为20．1－31．0μm，壁薄而平滑，柄多为棍棒形；雄器围生，球形或扁球形或圆筒形，卵孢子球形，黄褐色，壁厚而平滑，满器或不满器，直径为15－28μm。该菌最适生长温度为25－30℃，最高生长温度大于35℃。因此，将浙江无土栽培系统长瓜疫病病原菌鉴定为Phytophthora capsici Leonian。     

抗菌肽Thanatin基因表达载体构建与表达

根据大肠杆菌的密码子偏好性,人工设计并合成了3条寡核苷酸片段,相邻片断有17个碱基的重叠区,通过PCR扩增得到抗菌肽Thanatin基因,将此基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,然后将重组质粒pGEX- Thanatin转化E.coli BL 21,经IPTG诱导进行融合表达.通过SDS - PAGE分析,融合蛋白GST -Thanatin 表达成功.