小金海棠抑制性消减cDNA文库的构建及文库质量分析

构建小金海棠抑制性消减文库,为进一步大量筛选、克隆苹果铁高效基因、果树转基因工程奠定基础。试验是在提取水培条件下小金海棠缺铁(EDTA-Fe2＋,4μmol/L)和正常供铁(EDTA-Fe2＋,40 μmol/L)的根的总RNA,经过LD-PCR扩增双链cDNA后,利用抑制性消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次抑制性PCR,构建了小金海棠缺铁条件下包含1200个独立克隆的消减cDNA文库。用菌落PCR检测,结果显示插入片段大小范围在300~800bp之间,提取质粒进行PCR和质粒RsaⅠ酶切同样也得到一致性的结果。     

草莓5个品种的果实香味成分分析

以草莓品种红颜、章姬、枥乙女、甜查理和卡姆罗莎等5个品种为试材, 采用顶空固相微萃取和气相色谱—质谱联用技术, 分析不同草莓品种挥发物种类中特征香味成分的异同, 为草莓香味育种提供依据。结果表明, 5个品种中酯类均占了约一半的比例(40% ～62.5% ) , 酯类在草莓香味中起重要作用。红颜的香味主要由香味醇(沉香醇、橙花叔醇和1 - 辛醇) 、香味酯(丁酸甲酯和丁酸乙酯、己酸甲酯和己酸乙酯) 构成; 枥乙女主要由香味醇(沉香醇和橙花叔醇) 和5 - 辛基- 二氢- 2 (3H) - 呋喃酮构成; 章姬主要由香味醇(沉香醇和1 - 辛醇) 、香味酯(丁酸甲酯和异戊酸己酯、己酸甲酯和己酸乙酯、辛酸甲酯和辛酸乙酯) 、4 - 甲氧基- 2, 5 - 二甲基- 3 (2H) - 呋喃酮及青叶醛构成。甜查理和卡姆罗莎的酯类类似, 主要有丁酸辛酯、乙酸辛酯和己酸辛酯, 辛基酯类含量非常多, 前者达到15.26% , 后者高达22.49% , 而辛基酯类在3个日本品种中没有发现。甜查理含有橙花叔醇、1 - 辛醇和5 - 己基- 二氢- 2(3H) - 呋喃酮, 而卡姆罗莎这3种香味物质含量少, 这可能是卡姆罗莎香味淡的主要原因。     

有机肥施用量和树龄差异对苹果园土壤真菌群落的影响

为揭示有机肥施用量对不同树龄果园土壤真菌群落的影响,在北京市昌平区选择不同有机肥施用量和种植年限的苹果园,采集0～20cm的土壤样品,利用Illumina Miseq高通量测序平台测定及分析土壤真菌丰富度、群落组成和群落结构,并与土壤理化性质和果实品质进行关联分析。结果表明:1)该苹果园长期施用有机肥,土壤有机质和速效养分(特别是碱解氮)含量增加;2)有机肥施用量相同时,随着树龄增加果园土壤真菌丰富度增加;而有机肥施用量对幼龄果园土壤真菌的丰富度和成龄果园土壤真菌群落的多样性有更多的影响;3)该苹果园土壤真菌包括7个门,其中子囊菌门和担子菌门为优势菌群,并且有机肥施用量使优势菌的占比发生改变,随有机肥施用量的增加,子囊菌门相对丰度增加,而担子菌门相对丰度降低;4)通过RDA分析表明,假霉样真菌属、毛壳菌属和镰刀菌属与果园土壤有机质和速效养分之间存在正相关关系,同时在果实可滴定酸和可溶性糖含量上也有正向作用。综上所述,适量增加有机肥施用量可增加有益真菌组成,从而提高树体长势和果实品质。     

反光膜提高设施栽培葡萄品质试验

研究了反光膜提高日光温室栽培87-1葡萄品质和产量的效果。结果表明,蓝色、红色反光膜和聚酯镀铝膜处理均提高了葡萄叶幕下方的光照强度,光照强度聚酯镀铝膜>红色反光膜>蓝色反光膜;蓝色、红色反光膜处理分别显著提高了葡萄叶幕下方蓝光、红光和远红光比率,聚酯镀铝膜对光质影响不大;蓝色、红色反光膜处理均显著提高了葡萄单粒重、可溶性糖含量、花青苷含量和株产,效果基本相同,且好于聚酯镀铝膜处理,聚酯镀铝膜处理对葡萄浆果花青苷含量基本无影响。     

小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（MxSAMS）的克隆和表达分析

从本实验室建立的小金海棠缺铁差减文库中分离出一个cDNA片段,在GenBank中发现该片段与其它植物的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因具有90%的同源性。利用RACE技术成功地获得小金海棠（Malus xiaojinensis）SAMS基因(MxSAMS)的cDNA全长序列（GenBank登录号：EU639408）,该基因cDNA全长1 479 bp,最大开放阅读框1 176 bp,编码392个氨基酸,酶蛋白理论分子量为42.99 kD;与其它植物的蛋白质氨基酸序列同源性在88.1%~92.6%之间。推测的MxSAMS蛋白质三级结构包含3个保守结构域和一个保守的ATP结合位点GAGDQG。Southern 杂交显示,MxSAMS基因在小金海棠基因组中是单拷贝的。半定量RT-PCR结果表明,该基因在小金海棠的根和叶中均受缺铁胁迫诱导增强表达。     

小金海棠Fe(Ⅱ)转运蛋白基因在拟南芥突变体中的功能分析

铁是植物生长发育所必需的微量元素,在植物体的生理代谢过程中发挥着极为重要的作用(Thoiron etal.,1997)。苹果是重要的经济作物,缺铁黄化现象较为普遍,严重影响了     

小金海棠Fe（II）转运蛋白基因在拟南芥突变体中的功能互补研究

MxIrt1基因是从小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）中克隆得到的Fe（II）转运蛋白基因，具有“ZIP基因家族”的保守功能域，推测该基因与苹果中铁的转运吸收有关。本研究构建MxIrt1基因的植物表达载体pCWIrt，通过农杆菌介导转化拟南芥IRT1突变体irt1-1。GUS染色以及Southern杂交检测结果显示，MxIrt1基因已经整合到拟南芥基因组中。在缺铁胁迫条件下，转基因植株提高了突变体irt1-1的耐缺铁能力，表明MxIrt1基因参与了铁的吸收。     

RAPD技术在葡萄种质鉴定上的应用

为建立一种简单，快捷的方法以鉴定葡萄（Vitis)种质资源，对CTAB，SDS和高盐法3种DNA提取方法进行了比较。结果表明，改良的CTAB法较为适合葡萄基因组DNA的提取。通过对TaqE,Mg^2 ,dNTP，模板DNA，Primer不同浓度的优化实验以及对PCR反应程序的筛选，建立了适合葡萄基因组RAPD分析的技术体系。运用该体系对部分葡萄品种进行RAPD分析。结果表明，采用适合的引物在该体系条件下能够达到鉴定葡萄种质资源的目的，并可应用到葡萄的遗传图谱，指纹图谱及分子标记等分子生物学的研究中。     

生物技术在果树上的应用：—现状及尚需积累的基础性研究

本文在全面总结果树生物技术研究进展的基础上，对我国果树种质资源特性的研究。高效基因型的遗传背景和遗传规律的研究，作了重点论述。指出应尽快建立果树生物技术体系，以及针对果树特有习性和综合性状开展果树生物技术基础性研究工作。     

利用RAPD技术筛选茶淀玫瑰香葡萄优系

对从天津汉沽地区 4 0 0 0hm2 栽培茶淀玫瑰香葡萄中选出的优系D13、C4 6、C5 7、C87、C早、A134、A5 7、A14 3、A14 4、长 2、长 4与小粒率高的株系 (差 1、差 2 )、玫瑰香葡萄亲本 (黑汗、亚历山大 )、昌黎和郑州两产区的玫瑰香葡萄为对照 ,进行RAPD鉴别 ,计算出各株系间遗传距离的变化并进行聚类分析。